摘要：对党参基因组DNA提取方法优化、issr体系形成及引物筛选三方面进行探讨,为研究党参居群遗传多样性及药材DNA鉴定奠定基础。经比较改良CTAB法、改进的高盐SDS法和试剂盒三种常用DNA提取方法,发现改良CTAB法效果最佳;利用优化设计并结合有关文献优化issr反应体系,最优反应体系为:50μL总反应体积中含约20ng DNA模板,1.25UTaq DNA聚合酶,2.25mmol.L-1Mg2+,200μmol.L-1dNTP,0.50μmol.L-1引物。以此体系为基础进行引物筛选,在100条issr引物中筛选出13条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。

摘要：[目的]确定适合苦参稳定的issr-pcr反应体系。[方法]采用经典的CTAB法提取苦参新鲜幼嫩叶片DNA;针对Mg2+、d NTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶进行正交设计L_(16)(4~5),优化黔产苦参issr-pcr反应体系。[结果]最适issr-pcr反应体系为:模板DNA 90 ng、0.4μmol/L引物、2.0 mmol/L Mg^(2+)、TaqDNA聚合酶0.5 U、0.5 mmol/L d NTPs。[结论]建立的苦参issr-pcr反应体系,经过19份苦参样品检验,证明该体系稳定可靠,可用于苦参遗传多样性分析。

摘要：目的探讨九眼独活基因组DNA提取方法、issr反应体系优化及引物筛选,为研究九眼独活居群遗传多样性及原药材DNA鉴定奠定基础。方法采用改良的CTAB法与常规CTAB法对九眼独活的基因组进行提取,通过紫外、电泳、pcr-issr检测方法进行比较。结果实验表明,改良的CTAB法得到的DNA浓度和纯度较高,并可很好地应用于issr分子标记分析;以Mg2+、dNTP、引物和聚合酶建立L9(34)正交设计,并同时考察退火温度和模板浓度,建立适宜的25μLissr-pcr体系为:模板30ng,Mg2+3.5mmol.L-1,dNTP0.6mmol.L-1,引物0.4μmol.L-1,Taq酶1U。结论以此体系为基础进行引物筛选,在40条issr引物中筛选出13条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。