摘要：以烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)基因组DNA为模板,采用单因素和正交设计L_(16)(4~5)相结合的方法对影响issr-PCR反应的主要因子进行优化,并对采自东北三省烟区的20个烟草靶斑病菌菌株进行issr分析,建立了适宜于病菌的issr分子标记的最佳反应体系,即20μL的反应体系中含有模板DNA 30ng,Mg^(2+)浓度2.0mmol·L^(-1),d NTP浓度0.20 mmol·L^(-1),Taq酶1.0U,引物浓度0.4μmol·L^(-1)。利用优化的反应体系从20个issr引物中筛选出13个多态性和重复性好的引物,对20个烟草靶斑病菌菌株进行issr分析,共扩增出132条带,多态条带比率为73.48%,在相似系数0.74处将其划分为3个类群,其中LTL-7、HLK-1、HBX-2、HBX-4、LFC-9、LTL-5、LTL-9和JLH-1共8个菌株被划分在IGⅠ中;IGⅡ中包括LTL-6、LKD-8、HLK-3、LTL-115、LTL-2、LFC-4和LTL-8共7个菌株;其余5个菌株分别为LTL-66、LTL-111、HLK-4、JLH-3和LTL-22被划分到IGⅢ中。分析结果表明issr遗传聚类组群与菌株的地理来源具有一定的相关性,而与菌株的致病性无明显的相关性。

摘要：以14份乌腺金丝桃为试材,采用L_(16)(4~5)正交实验设计,建立并优化乌腺金丝桃的issr-PCR反应体系,并利用优化的反应体系分析供试材料间的遗传多样性。结果表明:20μL issr-PCR反应体系中应含有Taq DNA聚合酶1.0U,dNTPs 0.2mmol·L^(-1),Mg^(2+)2.0mmol·L^(-1),模板DNA 45ng。从45条issr引物中筛选出11条多态性引物,利用筛选的多态引物对14份乌腺金丝桃材料进行了issr遗传多样性分析,共扩增出85条带,其中多态性条带57条,占67.06%;4个乌腺金丝桃居群的遗传相似系数介于0.375 1~0.725 2,平均值为0.541 6;通过UPGMA进行聚类分析表明,14份材料可分为3个类群4个亚群。乌腺金丝桃居群间遗传多样性水平明显高于居群内,其遗传距离与地理距离具有一定的相关性。

摘要：为从小桐子嫩叶中提取高质量的基因组DNA,采用改良CTAB法提取的基因组DNA通过OD260/OD280比值测定,琼脂糖凝胶电泳和issr-PCR扩增检测,结果表明改良CTAB法提取的DNA纯度高,可作为issr分子标记的模板。同时,采用正交设计的方法,对影响小桐子issr-PCR反应体系中的4个因素(引物、Taq DNA Polymerase、10×Buffer(含Mg2+)、dNTPs)在3个水平上进行优化试验。建立了适合小桐子的既稳定又能扩出最多数量谱带的issr最优反应体系,即20μl的反应体系中含有30ng模板DNA、0.2mmol/L dNTP、0.3 U Taq酶Polymerase、0.8μmol/L Primer、3.0mmol/L10×Buffer(含Mg2+)。

摘要：目的：建立珠子参的issr-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。方法采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取珠子参总DNA ，并用正交设计实验对其issr反应体系条件进行筛选及优化。结果提取的基因组DNA纯度和完整性较好，A260/A280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，可满足issr-PCR扩增要求。珠子参issr分析的最适反应体系为：在20μL PCR反应体积中，含10 ng模板DNA、0．20 mmol·L -1 dNTPs、1．5μmol·L -1引物、3U TaqDNA 聚合酶、2μL 10× PCR Buffer、3 mmol·L -1 Mg2＋。扩增程序为：95℃预变性5 min ，94℃变性30s，58℃退火30 min ，72℃延伸1 min ，循环40次，72℃延伸10 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。结论建立的issr-PCR反应体系可用于研究珠子参的遗传变异和遗传多样性。

摘要：运用L16（4^5）正交设计对芒果issr反应的5个因素，即DNA模板浓度、M矿浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度在4个水平上进行优化试验，通过不同反应体系扩增效果比较，建立优化的芒果issr反应体系，

摘要：选取白花马蹄莲和10个颜色有代表性的彩色马蹄莲栽培品种为材料,采用改进的SDS法提取叶片基因组DNA,通过正交设计研究Mg2+、Taq DNA聚合酶和模板DNA、引物的影响,确定彩色马蹄莲最佳issr反应体系为:每20μL中含1×PCR Buffer、1.5mmol/L MgCl2、0.6μmol/L引物、20ng模板DNA、1UTaqDNA聚合酶。从100个引物中筛选出的15条进行分析,共获得了109条带,其中多态性为99条,占总数的90.8%。选用NTSYS软件进行聚类分析,绘出了供试材料的亲缘关系图,为系统进行马蹄莲属植物的遗传多样性分析和品种选育提供了参考。