摘要：目的:研究shRNA干扰Wnt4基因对胸腺瘤细胞jnk基因表达的影响及Wnt4基因发挥作用可能依赖的信号通路。方法:根据shRNA设计原则,设计针对Wnt4基因的4个干扰靶点,构建Wnt4-sh RNA干扰质粒,经鉴定片段成功插入后,将空白质粒、TR001质粒和重组的4个干扰质粒分别转染体外培养的胸腺瘤细胞。采用RT-PCR检测转染后Wnt4基因表达,挑选对Wnt4基因抑制效果最好的干扰质粒进行后续实验。将胸腺瘤细胞分3组:空白对照组;转染TR001质粒组;转染干扰质粒组。用LipofectamineTM2000转染,采用RT-PCR及Westernblot检测细胞Wnt4和jnk的mRNA及蛋白表达。结果:shRNA-Wnt4-3质粒能显著抑制Wnt4基因表达,抑制率为52.37%(P<0.05)。Wnt4基因下调后胸腺瘤细胞内jnk基因表达也显著下调(P<0.01),差异有统计学意义。结论:采用shRNA干扰Wnt4基因后胸腺瘤细胞内jnk基因表达显著下调,说明Wnt4基因与jnk基因的表达有相关性,Wnt4基因可能依赖于非经典的Wnt/jnk信号通路发挥作用。

摘要：1.概述 田湾核电站是我国引进俄罗斯AES—91型建造的核电机组,在该机组检、维修工作中,盛装硼酸溶液的jnk水箱的检、维修工作是大量检修工作中很重要的一部分。由于缺乏相关的维修经验和先进技术,必须要依赖国外公司提供技术服务,但是国外公司在提供技术服务的同时并不公开技术,形成了技术垄断。另外,国外公司技术服务费用高昂,导致了企业成本的增加,降低了企业经济效益。

摘要：血管平滑肌的凋亡增加与动脉瘤的形成与破裂有关。根据以往的研究表明TNFα在增加jnk信号通路的激活以及肥大细胞凋亡中起重要作用,在已经破裂动脉瘤的血管壁上可以观察到jnk通路的激活。因此,我们研究了是否巨噬细胞所分泌的TNFα对于激活jnk通路及VSMC凋亡以及动脉瘤破裂方面具有重要作用。通过收集破裂和未破裂病人的血管平滑肌细胞,对照相同条件下的无动脉瘤患者的正常的血管平滑肌。通过流式细胞术检测巨噬细胞介导的浸润和凋亡。并得到TNFα的表达量、jnk信号通路及Bax的表达量。设计四组实验模型,分别为对照组、TNFα阻断剂组、jnk通路阻断剂SP600125组和TNFα阻断剂组+SP600125组。通过Western bloting检测jnk信号通路活性及Bim/Bax蛋白表达。通过流式细胞仪检测caspase-9和caspase-3活性,判断细胞凋亡的程度。与对照组以及IA未破裂组相比较,IA破裂组巨噬细胞浸润、TNFα表达、细胞凋亡、jnk活性、Bax表达增加。相反,阻断TNFα和/或jnk可有效抑制jnk活性,降低Bim/Bax蛋白表达,抑制caspase-9和caspase-3活性,降低VSMC细胞凋亡。在IA的病人中,巨噬细胞的浸润增加及TNFα的表达量显著提升。因此,我们分析,巨噬细胞分泌的TNFα可上调凋亡蛋白Bim和Bax的表达,通过激活jnk信号通路,启动VSMCs内源性凋亡,可能参与IA的形成和破裂。

摘要：背景:细胞凋亡在椎间盘退变过程中发挥重要作用,而导致细胞凋亡的因素很多,氧化应激是导致细胞凋亡的一个重要因素。目的:从细胞内信号转导水平验证过氧化氢对大鼠髓核细胞氧化应激损伤的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,试验于2008-03/10在山东省创伤骨科研究所完成。材料:p38MAPK特异性阻断剂(SB203580)、jnk特异性阻断剂(SP600125)购自碧云天生物技术有限公司;大鼠椎间盘来自2只新生24h SD大鼠。方法:原代培养大鼠髓核细胞,将生长良好的髓核细胞制成细胞悬液,随即分为4组:H202组:用0,50,100,200,400,800μmol/L H2O2刺激;对照组:不加刺激的细胞;SB203580+H2O2组:给予特异性p38MAPK阻断剂SB203580预孵育细胞,再给予H2O2刺激;SP600125+H2O2组:给予特异性jnk阻断剂SP600125预孵育细胞,再给予H2O2刺激。上述处理后检测相关指标。主要观察指标:以免疫组织化学检测P-p38和P-jnk的表达情况及表达位置;Western印迹法检测SAPK/jnk、p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果:H2O2能够激活髓核细胞内p38和jnk的活性;SB203580能够有效地抑制p38MAPK的活性,而SP600125则能够有效的抑制jnk的活性;免疫荧光显示P-p38MAPK和P-jnk在细胞质和细胞核均有表达中,而对照组未发现。结论:大鼠髓核细胞受氧化应激后可通过p38MAPK和jnk通路导致细胞凋亡。

摘要：目的研究糖尿病血管内皮细胞NF-κB信号途径,从而为防治糖尿病血管并发症提供新的治疗策略。方法设计、合成针对NF-κB基因ShRNA的寡核苷酸序列;构建腺病毒载体质粒,转染293A细胞,进行病毒包装、扩增;腺病毒载体转导血管内皮细胞,通过RT-PCR和Western blot从mRNA以及蛋白质水平验证构建的病毒载体对血管内皮细胞NF-κB表达的抑制效应;用Western blot验证NF-κB干扰的血管内皮细胞中jnk(c-Jun氨基末端激酶)的变化。结果高浓度葡萄糖的条件下,内皮细胞NF-κB的表达量显著升高;干扰RNA有效干扰了正常血糖和高血糖环境下NF-κB及p-jnk的表达;p-jnk的表达随着NF-κB表达的下降而下降。结论高糖通过NF-κB及jnk的信号传导通路影响内皮细胞的凋亡。