摘要：ki-67已成为预测乳腺癌患者治疗反应以及预后的重要生物学标志物。其检测一般采用免疫组织化学方法，但是目前尚无统一的操作指南对乳腺癌ki-67免疫组织化学检测进行规范。我们采用组织芯片和计算机图像分析技术分析、评价各因素对ki-67染色结果的影响，建立了乳腺癌ki-67标准化免疫组织化学检测流程，并通过与乳腺癌分子分型等临床病理参数的相关性分析进一步验证其临床应用的有效性，为乳腺癌ki-67规范化检测提供依据。

摘要：目的 观察ki-67启动子内能与细胞核蛋白结合的转录因子Sp1结合位点,探讨肿瘤细胞ki-67基因高表达机制.方法 提取Hela细胞核蛋白.针对ki-67启动子内4个潜在Sp1位点区域A1（-198～-172）、A2（-170～-144）、A3（-63～-37）、A4（-14～＋12）,以及没有Sp1结合位点的阴性对照区域C（-117～-91）,设计相应的Sp1一致性寡核苷酸探针和Sp1突变性寡核苷酸探针,凝胶阻滞电泳实验（EMSA）验证Sp1探针与Hela细胞核蛋白的结合活性.结果 EMSA显示A2、A3、A4一致性探针均可以和Hela细胞核蛋白结合,这种结合可以被相应的100倍浓度非标记的一致性探针竞争抑制,不能被100倍浓度的非标记的突变性探针所抑制.出现结合带的反应中加入Sp1抗体后观察到明显的Supershift现象.A1和C相应探针不能和Hela细胞核蛋白发生结合反应.结论 ki-67启动子-170～-144、-63～-37和-14～＋12区域上存在能与肿瘤Hela细胞核蛋白结合的Sp1结合位点.

摘要：目的 探讨乳腺癌中ki-67免疫组化检测过程中主要影响因素对其染色结果的影响。方法 收集60例癌灶直径≥2.5cm的乳腺癌新鲜手术标本,制作组织芯片,采用免疫组化两步法染色和图像分析,比较不同影响因素下乳腺癌ki-67阳性细胞百分数的变化。结果 不同冷缺血时间（0.5、1、3和6h）分组的ki-67增殖指数差异无统计学意义（χ^2=5.536,P=0.136）。不同固定时间分组（3、12、24、48和96h）ki-67增殖指数均值分别为20.58%、26.84%、28.93%、29.91%和27.91%,差异有统计学意义（χ^2=13.837,P=0.008）。抗原修复法分组中,微波pH6.0的柠檬酸缓冲液组、微波pH9.0的EDTA缓冲液组、高压pH6.0的柠檬酸缓冲液组和高压pH9.0的EDTA缓冲液组ki-67增殖指数均值分别为22.66%、28.93%、26.72%和32.62%,差异有统计学意义（χ^2=17.967,P=0.000）。一抗克隆号分组中,MIB1、SP6、7B11和EP54组ki-67增殖指数均值分别为28.93%、32.88%、24.98%和20.47%,差异有统计学意义（χ^2=15.755,P=0.001）。二抗显色系统EnVision、PV8000和MaxVision组的ki-67增殖指数差异无统计学意义（χ^2=0.332,P=0.847）。结论 乳腺癌中ki-67免疫组化染色结果对于6h以内标本冷缺血时间和较长的固定时间有较强耐受性,但固定时间低至3h、不同的抗原修复法和抗体克隆号选择对检测结果有较大影响,二抗显色系统选择对检测结果无明显影响。

摘要：目的检测PAX6、ki-67及MMP-9在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达,探讨其与RB临床组织病理学特征之间的关系及临床意义。设计实验性研究。研究对象石蜡包埋RB组织40例,其中<3岁组27例,≥3岁组13例。方法采用免疫组织化学Elivision法检测PAX6、ki-67及MMP-9在40例RB组织中的表达情况,分析该3种蛋白表达与患者性别、眼别、年龄、视神经受侵情况以及是否化疗等临床组织病理学特征的关系,并分析3种蛋白表达之间的相关性。主要指标RB组织中PAX6、ki-67、MMP-9的表达及临床组织病理学特征。结果 40例RB组织中,PAX6、ki-67及MMP-9的阳性表达率分别为52.5%、55.0%、57.5%。ki-67在年龄大于3岁组的阳性表达率高于年龄小于3岁组(χ2=6.825,P=0.016),PAX6(χ2=0.631,P=0.511)及MMP-9(χ2=0.129,P=1.000)的表达与年龄无显著相关性。3种蛋白的表达均与性别及眼别无显著相关性。PAX6、ki-67及MMP-9在球后视神经受侵袭组的阳性表达率均高于未受侵袭组(χ2=14.401,P=0.017;χ2=11.831,P=0.046;χ2=13.961,P=0.038)。PAX6及ki-67在未化疗组的阳性表达率均高于化疗组(χ2=8.120,P=0.010;χ2=6.465,P=0.025)。PAX6和ki-67的表达呈正相关(r=0.347,P=0.028)。结论 PAX6的高表达促进了RB细胞的增生;PAX6、ki-67和MMP-9的高表达与RB的侵袭有一定的相关性;化疗对RB中PAX6和ki-67的表达有一定的抑制作用,在一定程度上可以降低RB侵袭转移的风险。

摘要：目的通过研究复发胶质瘤与初发胶质瘤肿瘤组织中细胞增殖核抗原ki-67表达水平的变化,了解胶质瘤复发后肿瘤的侵袭性的变化规律。方法回顾性分析免疫组化发检测的20例复发胶质瘤患者的首次手术及复发后再次手术的胶质瘤组织中ki-67表达水平,自身前后配对设计t检验;两次手术间隔时间与ki-67之间相关性以Pearson相关分析。结果复发胶质瘤肿瘤组织中ki-67较首次手术肿瘤组织的明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论本研究表明:复发胶质瘤的侵袭性较初发胶质瘤明显增高且增高的幅度不受两次手术间隔时间影响。

摘要：目的 观察阿维A联合克拉霉素对人口腔表皮样癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨药物对肿瘤抑制的作用机制.方法 用人口腔表皮样癌细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型.采用随机双盲设计,将31只裸鼠随机分6组,对照组、安慰剂组、阿维A组、克拉霉素组、阿维A＋安慰剂组、阿维A＋克拉霉素组.对照组6只,余各组均为5只裸鼠.各组治疗3周后测量移植瘤体积和重量,用RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）和核转录因子κB（NF-κB）mRNA的表达.对移植瘤体进行病理学分析,采用免疫组化染色检测各组肿瘤中VEGF、细胞增殖指数ki-67的表达及其微血管密度（MVD）.采用SPSS 19.0软件进行统计分析,计量资料的均数比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD检验.结果 阿维A＋克拉霉素组瘤体体积、瘤体重量均低于其他5组,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.实时荧光定量PCR检测,阿维A＋克拉霉素组VEGF、NF-κB mRNA的表达均低于对照组、克拉霉素组、阿维A组,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.免疫组化检测,与对照组、克拉霉素组、阿维A组相比,阿维A＋克拉霉素组VEGF表达率均下调（均P＜ 0.01）,着色浅;MVD显著降低（均P＜ 0.01）,微血管分布较稀疏;ki-67阳性指数均降低（均P＜0.05）,肿瘤细胞增殖减少.结论 阿维A联合克拉霉素能协同抑制人口腔表皮样癌裸鼠移植瘤的生长,并下调VEGF表达,抑制血管生成和肿瘤增殖.