摘要：目的　研制肝片吸虫的候选DNA疫苗。　方法　根据国际发表的相关序列设计引物 ,在引物端加酶切位点 ,应用RT PCR方法。　结果　成功地将肝片吸虫组织蛋白酶l1(FheCl1)基因cDNA序列克隆进真核表达载体 pcD NA3 .1中。对所克隆的FheCl1基因序列及其推导的氨基酸序列进行分析 ,发现其与已发表序列相比 ,核苷酸序列有4.3 %的差异 ;推导的氨基酸序列有 6.9%的差异。两者蛋白质二级结构主要有 3个区域的区别 ,磷酸化位点有 10个不同 ,但共有一由 2 0个疏水氨基酸残基组成的保守区域。　结论　实验构建的 pcDNA3 .1 FheCl1重组质粒是一种新型的抗肝片吸虫DNA疫苗候选重组质粒 ;肝片吸虫可能存在不同的亚种 ,两者的FheCl1基因编码的第 1～ 2 0个氨基酸残基可能组成膜螺旋。

摘要：目的人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)是引起宫颈癌的主要型别,HPV16主要衣壳蛋白l1具有激活宿主免疫细胞,诱导中和抗体产生的功能。本研究旨在探讨HPV16l1基因变异与宫颈癌发生的关系。方法共纳入2015-09-30-2017-03-31昆明医科大学第三附属医院妇科89例感染HPV16的宫颈癌患者(病例组)和132名感染HPV16无宫颈病变的感染者(对照组)作为研究对象。采集研究对象宫颈样本扩增HPV16l1序列并测序,分析病例组和对照组中HPV16各亚型的分布情况以及HPV16l1基因突变的分布情况,探讨HPV16l1基因变异与宫颈癌之间的关系。结果发现存在2种HPV16亚型分布,分别为亚洲型(As)和欧洲型(EUR),病例组中发现84例As亚型(94.4%),5例EUR亚型(5.6%),对照组发现122例As亚型(92.4%),10例EUR亚型(7.6%),经分析各亚型在病例组和对照组之间的分布差异无统计学意义,P=0.570。2个核苷酸的突变引起A6178C(N207T)和A7036C(K493T)氨基酸的改变,其中A6178C(N207T)突变仅发生在As亚型中,而A7036C(K493T)仅发生在EUR亚型中。结论通过HPV16l1基因的序列比对分析后发现,HPV16l1基因在宫颈癌和无宫颈病变的感染者中均存在变异,本研究结果可为基于HPV l1疫苗的研发设计提供参考数据。

摘要：目的　从已感染人乳头瘤病毒 (HPV)的新鲜宫颈癌组织中获得 HPV16型晚期表达基因 l1,为 HPV感染的检测和治疗奠定基础 .方法　根据引物设计原则设计一对特异引物 ,并用 PCR方法从宫颈癌组织中获得 l1基因 ,用 p GEM- T作为克隆载体 ,构建重组质粒并以双脱氧法双向测定插入片段序列 ,拼接出 l1基因序列 ,自动测序验证并分析序列 .结果　从西安地区 1例宫颈癌临床标本克隆到的 1株 HPV16型 l1蛋白编码序列经 Bl AST2 .0分析与既往报道序列存在高度同源性 .结论　构建的重组质粒为进一步研究 l

摘要：目的了解萍乡地方株HPV16 l1基因结构特点,分析其结构蛋白l1基因多态性及蛋白特性变化,为基于l1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法设计HPV16型l1基因特异性引物,从宫颈脱落上皮细胞中提取DNA,进行PCR扩增鉴定,将扩增的片段同T-载体连接,然后导入到大肠杆菌DH-5α中培养,提取质粒DNA进行测序。结果测定的序列与标准基因序列（NC Sbjct 496）比较,萍乡地区宫颈癌感染的HPV16型l1基因同源性为98.9%~99.6%,分别形成5种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但有1处由于核苷酸的丢失造成翻译的氨基酸也相应发生变化。结论萍乡地方株HPV16 l1核酸有一定程度的变异,可能会造成HPV16 l1蛋白免疫原性的差异。.此株改变也可能是本地区导致宫颈癌的主要原因。实验结果为研制适应本地区的基于HPV16 l1的基因工程疫苗提供了可靠实验依据。

摘要：目的:从人乳头瘤病毒(HPV)阳性的宫颈癌组织中克隆HPV18型主要衣壳蛋白l1基因全长,构建真核表达载体及验证目的蛋白的表达。方法:根据HPV18-l1基因全长设计一对特异引物,用PCR方法从宫颈癌组织DNA中获得l1基因,构建pMD18T重组质粒扩增l1基因,以pVAX1为真核表达载体构建重组表达质粒,转染入地鼠肾细胞BHK,采用免疫细胞化学方法检测HPV18-l1蛋白的表达。结果:从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV18-l1基因序列与Genebank报道序列高度同源,其真核表达产物能够与特异性抗体发生特异性结合。结论:成功构建pVAX1-HPV18-l1重组真核表达质粒,为研制地区特异性HPV预防性疫苗提供基础实验参考。

摘要：试验旨在表达牛乳头瘤病毒(BPV)的l1衣壳蛋白,并制备其多克隆抗体。对疑似牛乳头状瘤的病料进行病理组织学检查,采用l1基因简并引物FAP59/FAP64进行扩增,然后设计特异性引物,将衣壳蛋白l1基因亚克隆至pET-30a(+)表达载体中,构建重组原核表达载体pET30a-BPV2-l1,在*** RosettaTM(DE3) plysS宿主菌中表达重组蛋白rBPV2-l1,并以纯化的rBPV2-l1蛋白为免疫原制备兔抗BPV2-l1蛋白多克隆抗体,随后间接ElISA检测其效价,并进行间接免疫荧光试验分析。病理组织切片观察结果显示,病变部分表皮细胞增生、角质过度并出现细胞挖空等BPV感染的组织病变情况;序列分析确定BPV分离株的基因型为2型,l1基因编码区长1 494 bp,可编码一个含有497个氨基酸的衣壳蛋白,蛋白分子质量为55.5 ku;与各型BPV的l1氨基酸序列系统进化树分析结果显示,其与BPV2-SW01(GenBank登录号:KC878306.1)、BPV2(GenBank登录号:KX113620.1)处于同一遗传进化分支,且属于Delta属成员;诱导表达的rBPV2-l1蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;间接ElISA法检测多克隆抗体效价高达1∶163 840,间接免疫荧光分析表明,兔抗BPV2-l1多克隆抗体能与瞬时表达的BPV2-l1蛋白发生特异性反应。以上结果证实,本研究成功克隆、表达了BPV2 l1基因,且重组蛋白rBPV2-l1具有较好的免疫原性,所制备的BPV2-l1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,为进一步研究BPV2亚单位疫苗奠定基础。

摘要：目的从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白l1基因全长,构建表达载体,并验证目的蛋白的表达。方法根据基因全长设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得l1基因,以pMD18T为克隆载体,构建重组质粒进行亚克隆,再以pcDNA3.1(+)为载体构建表达质粒,转染至人肝细胞系H7702,提取蛋白,采用Western Blot方法检测HPV16-l1蛋白的表达。结果从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV16型l1蛋白编码序列与Genebank报道序列高度同源,其真核表达产物与特异性抗体能够特异性结合。结论成功构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HPV16-l1,为进一步研制HPV预防性疫苗创造基础条件。

摘要：目的:了解温州地方株HPV16 l1基因结构特点,分析其结构蛋白l1基因多态性及蛋白特性变化,为基于l1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法:设计HPV16型l1基因特异性引物,从宫颈癌组织标本提取DNA,进行PCR扩增鉴定,PCR产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNAStar软件分析HPV16型l1基因多态性及蛋白特性变化情况。结果:测定的序列与标准基因序列(NC 001526)比较,温州地区宫颈癌感染的HPV16型l1基因同源性为99.1%～99.8%,分别形成8种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上与标准株相比较无明显变化。结论:温州地方株HPV16 l1核酸有一定程度的变异。

摘要：参考禽呼肠孤病毒s1133株（GenBank）l1基因序列设计3对特异性引物，采用RT—PCR方法对禽呼肠孤病毒内蒙古分离株C-98的l1基因进行了克隆和序列测定。结果表明：获得的C-98l1基因全长3959bp，其中包括21bp的5’非编码区和56bp的3’非编码区，阅读框位于5’端第22位核苷酸与3’端第3903位核苷酸之间。将C一98株与国内外禽呼肠孤病毒群和哺乳动物呼肠孤病毒群的不同分离株进行序列比较，结果显示：C-98与台湾地区分离株919和美国分离株1733、2408、S1133亲缘关系最近，其核苷酸同源性分别为99．8％、99．7％、99．7％、99．4％；与哺乳动物呼肠孤病毒l3基因核苷酸及其编码的氨基酸同源性较低，为43％～45％。

摘要：目的研究潮州地区优势型别人乳头瘤病毒(HPV)52型l1基因多态性。为基于l1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法采用核酸分子快速导流杂交分型技术(HybriMax)检出HPV52,提取101例HPV52单纯感染者宫颈脱落细胞DNA,通过4对特异性引物分别扩增HPV52-l1编码区全序列,进行测序及BlAST多态性分析。结果本研究成功获得73条HPV52l1基因全序列(1590bp)。该序列与天津参考株(GQ472848)的一致性为99%。在潮州地区发现的所有l1基因序列中有31个碱基是可发生变异的,其中25种为同义突变,6种为有义突变。根据基因多态性分东亚群和欧洲群2群。东亚群有13组,其中CZ52A105是本地最常见的变异株,占61.64%(45/73),该组称为潮州地方株,其编码序列与泰国清迈报道的IN141070株(HQ537743)完全匹配,其余各组(21/73)多态性国际上均尚未报道,他们均与天津报道的TJ49-52(GQ472848)株以及泰国报道的IN141070(HQ537743)株亲缘关系最近,有1～6个碱基不同。欧洲群有2组为CZ52E928(2/73)和CZ52E136(5/73),其基因序列分别与德国REF(X74481)株和北美洲Qv03719(HQ537745)株的l1全序列完全匹配。结论潮州地区HPV52-l1基因多态性与中国东南部和东南亚国家报道的类似,CZ52A105是潮州地方株。