摘要：目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体(lox-1)RNA干扰慢病毒表达载体并观察lox-1在氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠lox-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentilox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,构建慢病毒载体pLL3.7-loxl。慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒。慢病毒侵染H9C2大鼠心肌细胞,RT-PCR鉴定对lox-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测lox-1对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制lox-1能抑制H_2O_2诱导的细胞活力下降,减轻H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡,与H_2O_2组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建靶向大鼠lox-1基因RNAi慢病毒载体,lox-1激活可能在H_2O_2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用。

摘要：该研究针对lox-1基因(OLR1)设计并合成3条siRNA干扰序列,与双酶切的U6-vshR-NA-CMV-GFP慢病毒载体连接得到重组载体,包装慢病毒并测定滴度。采用最佳MOI值及转染条件,转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),转染96 h后通过RT-PCR和Western blot检测lox-1 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后ox-LDL诱导HUVEC的凋亡情况。测序证实靶向lox-1 RNAi慢病毒载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示转染后lox-1 mRNA及蛋白均受到不同程度抑制(P<0.05);流式检测结果显示抑制lox-1表达后ox-LDL诱导HUVEC凋亡显著减少(P<0.05)。该研究应用RNAi技术成功构建lox-1 RNAi慢病毒载体,有效抑制了lox-1的表达,显著减少了ox-LDL诱导的凋亡,为进一步研究lox-1基因沉默减轻内皮细胞损伤及相应保护机制奠定了基础。

摘要：lox—1是氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlowdensitylipoprotein，OX—LDL）、细菌、病毒、LPS等多种内源性和外源性致病因子的受体，是目前关于动脉粥样硬化疾病研究最热门的蛋白．在动脉粥样硬化病程中，lox-1在脂质堆积，内皮功能紊乱，斑块形成和破裂以及在此过程中的一系列炎性反应中都存在表达，且在多种细胞如血管内皮细胞，血管平滑肌细胞、巨噬细胞等多种细胞都有表达，是介导OX—LDL结合、内吞、降解的特异性受体，是与动脉粥样硬化治疗、预防和康复密切相关的因子，lox—1抑制剂已经成为抗动脉粥样硬化药物设计的新方向．本文就lox-1与动脉粥样硬化的研究做系统的综述．

摘要：目的研究lox-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外lox-1高表达细胞模型,用于探讨lox-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制。方法根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出lox-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-lox-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力。结果pEGFP-lox-1重建质粒经测序证实克隆的lox-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组lox-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍。表明所克隆的lox-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达lox-1受体的细胞。结论成功克隆人类lox-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究lox-1提供有利工具。