摘要：目的探讨凋亡抑制蛋白livin在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系,研究小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞系(SGC-7901)livin基因表达的抑制作用,以及livin基因沉默后对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法和Western blot法检测胃不同组织中livin基因mRNA和蛋白的表达,分析livin表达与临床病理的关系;设计两条针对人源livin基因的siRNA,分别转染SGC-7901细胞;RT-PCR法检测转染前后livin基因的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))的改变,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化。结果40例胃癌组织中,livin表达阳性率为47.5%(19/40);在癌旁组织和良性病变胃黏膜组织中,livin表达呈阴性。组织分化程度差、淋巴结转移者的livin表达率高(P<0.05)。livin特异性siRNA转染48h后,SGC-7901细胞中的livin mRNA表达受到抑制,细胞增殖能力减弱,对5-Fu和顺铂凋亡敏感性增加,同时IC_(50)降低(P<0.05)。结论livin在胃癌组织中表达增高,且与组织分化程度和淋巴结转移有关,可作为辅助胃癌预后判断的分子标志之一;RNA干扰可明显抑制livin基因表达,并使胃癌细胞的凋亡敏感性增加;livin有可能成为通过诱导细胞凋亡增强胃癌治疗效果的一个分子靶点。

摘要：目的 构建表达PTEN基因、同时又沉默livin基因的复合载体,探讨调控PTEN和livin基因对胃癌细胞的影响.方法 根据GenBank中人DNA的PTEN基因（NM_000314）和livin（NM_139317）基因的全长序列设计,分别构建出表达PTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN和沉默livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-livin.切下pRNAT-U6.1-silivin中的livin siRNA单元,将其重组入pCL-neo-PTEN;鉴定得到表达PTEN同时沉默livin基因的重组载体pCL-neo-PTEN-silivin.脂质体包裹3个重组载体分别转染胃癌BGC823细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测胃癌BGC823细胞PTEN和livin基因mRNA和蛋白表达情况.结果 经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子pCL-neo-PTEN、pRNAT-U6.1-livin和pCL-neo-PTEN-silivin.转染pCL-neo-PTEN-silivin的胃癌BGC823细胞中PTEN基因mRNA（0.897±0.112）和蛋白高水平表达,与对照组细胞（0.277±0.036）比较差异有统计学意义（P〈0.05）,与转染pCL-neo-PTEN的比较差异无统计学意义（P〉0.05）;转染pCL-neo-PTEN-silivin的胃癌BGC823细胞中livin基因mRNA（0.071±0.009）和蛋白表达抑制,与对照组细胞（0.338±0.044）差异有统计学意义（P〈0.05）,与转染pRNAT-U6.1-silivin的差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 成功构建出表达PTEN基因同时又沉默livin基因的重组载体.

摘要：目的:探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNAi)抑制大肠癌细胞系HT-29细胞livin基因表达对其生物学行为的影响方法:设计、合成靶向livin的siRNA,构建pGCSIL-GFP慢病毒载体,采用Real-time PCR和Western blot方法观察对人大肠癌HT-29细胞livin mRNA及蛋白质表达的抑制;并通过台盼蓝拒染法、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术及Matrigel穿膜侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞侵袭性的变化。结果:重组慢病毒livin-RNAi-LV1能够有效抑制livin的表达,使livinmRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);livin沉默能抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01),细胞周期重新分布,G_0/G_1期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G_2/M期细胞比例降低(P<0.05) HT-29细胞体外侵袭能力也明显减弱(P<0.01)。结论:利用慢病毒载体介导RNA干扰技术沉默livin基因的表达可以抑制大肠癌HT-29细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞侵袭性减弱。

摘要：【目的】构建和鉴定针对人抑凋亡基因livin的siRNA质粒载体,并研究其对宫颈癌HeLa细胞的作用。【方法】设计和合成针对人livin基因的siRNA寡核苷酸,定向克隆入质粒载体pmU6,脂质体瞬时转染入HeLa细胞中,用RT-PCR技术检测livin基因的mRNA表达水平,Western Blot技术检测livin蛋白表达水平。用MTT法分析HeLa细胞增殖改变,流式细胞仪检测HeLa细胞周期变化。【结果】livinsiRNA表达质粒能高效而特异地剔除HeLa细胞中livin的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),将HeLa细胞阻止在G1期。【结论】livin基因的siRNA对HeLa细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞凋亡可能是导致其细胞死亡的主要原因。

摘要：目的探讨livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786-O livin mRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰的livin ASODN,脂质体辅助转染至786-O细胞内。采用RT-PCR检测转染后livin mRNA的变化,细胞免疫化学、激光扫描共聚焦显微镜观察livin蛋白在细胞内的分布、转染后表达的变化及细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,激酶法测定Caspase3活性的变化。结果转染livin ASODN后,RT-PCR显示786-O细胞表达livin mRNA减少(P<0.01),激光扫描共聚焦显微镜下见细胞表达livin蛋白减少、细胞形态发生变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Caspase3活性明显增加(P<0.01)。结论livin ASODN能明显下调786-O细胞livin基因的表达,诱导细胞凋亡。抑制Caspase3活性是livin抑制细胞凋亡的途径之一。

摘要：目的 :以livinmRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸 (PS ODNs) ,探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法 :设计以livinmRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF 7乳癌细胞 ,用MTT、RT PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果 :在设计的一些反义核酸中 ,YMZ0 5能够有效地抑制livin基因的表达 ,增加caspase 3的活性 ,诱导MCF 7细胞凋亡 ,明显抑制其生长 ,结论 :通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF 7乳癌细胞生长、诱导其凋亡 ,livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。

摘要：目的设计构建livin的shRNA真核表达载体,并转染宫颈癌HeLa细胞,进一步研究该表达载体对目的基因livin的沉默效果,为宫颈癌基因治疗探索新方法。方法以livin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,构建重组体,根据livin基因cDNA序列,设计shRNA寡核苷酸序列,退火后克隆到空载体Pgenesil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。将构建好的真核表达载体转染宫颈癌HeLa细胞。结果经酶切鉴定出的重组体测序结果与目的序列相同,重组载体构建成功,并被成功转入宫颈癌HeLa细胞,可见绿色荧光蛋白表达,48 h转染效率最高。结论利用RNA干扰技术可成功构建小干扰RNA重组体,为进一步研究宫颈癌基因治疗奠定基础。

摘要：目的:研究膀胱癌相关livin基因在膀胱移行细胞癌组织中的表达以及livin基因表达与膀胱移行癌生物学行为的关系;研究抑癌基因p53在膀胱癌组织中突变以及livin表达与p53基因突变的关系。方法:100例膀胱移行细胞癌组织,设计livinα引物,以半定量RT-PCR的方法,检测膀胱癌组织livinα mRNA,以免疫组化法检测癌组织中p53蛋白。将膀胱肿瘤病理分级、临床分期、是否复发等生物学行为及p53蛋白染色强度分别量化,与组织livinα mRNART-PCR产物量进行等级相关分析。并以10例正常膀胱黏膜作为对照。结果:100例膀胱移行细胞癌,67例检测到livinα mRNA表达,10例正常膀胱黏膜组织未检测到livinα mRNA表达,livinα mRNA在膀胱移行细胞癌组织中表达率高于正常膀胱黏膜,χ2=14.4,P=0.000。livinα mRNA在膀胱癌组织中表达与p53蛋白阳性(rs=0.465,P=0.002)及肿瘤病理分级(rs=0.463,P=0.002)有相关性。结论:膀胱移行细胞癌组织中可见livinα mRNA高表达,livinα mRNA表达与膀胱癌病理分级及癌组织中p53蛋白呈正相关。

摘要：目的:研究利用计算机辅助设计抗肿瘤细胞凋亡基因livinmRNA的反义核酸。方法:利用RNAdraw和Sfold两种软件进行livinmRNA反义核酸的二级结构预测,并转染肿瘤细胞HeLa,诱导细胞凋亡。结果:用这种方法设计出5个反义核酸,它们能够有效地抑制肿瘤细胞HeLa的生长,促进其凋亡。结论:利用这两种计算机软件设计livinmRNA反义核酸是可行的,能够有效的促进细胞凋亡。

摘要：目的探讨livin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡和耐药的影响。方法设计合成特异性的livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体(Lip)介导转染K562细胞,实验分为Lip-ASODN组、Lip-MSODN组、Lip对照组和细胞对照组4组,采用反转录-PCR法检测livin mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法与膜联蛋白V异硫氰酸荧光素法检测livin ASODN与K562细胞增殖、凋亡及与高三尖杉酯碱(HHT)耐药的关系。结果 livin ASODN可显著抑制K562细胞增殖(P0.05)。livin ASODN可增加K562细胞对HHT的耐药性,半数抑制质量浓度为(0.37±0.02)mg.L-1;与HHT及小剂量阿糖胞苷联合应用可显著抑制细胞增殖(P<0.01)。结论 livin ASODN可下调livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,增加K562细胞凋亡及其对HHT的敏感性。