摘要：鲍曼不动杆菌已成为最普遍的医院致病菌,且耐药情况严峻.lpxc作为新抗菌药物靶点被大量研究,但鲍曼不动杆菌lpxc晶体尚未解析得到,基于其结构的药物设计等工作无法开展.以铜绿假单胞菌lpxc晶体结构为模板,通过同源模建方法获得鲍曼不动杆菌lpxc结构模型.较好的Ramachandran plot分布和Profile-3D结果验证了模型的合理性.用分子动力学模拟优化鲍曼不动杆菌lpxc模型,修补部分不合理构象.后续分子对接结果显示S构型的苄氧乙酰基羟肟酸类抑制剂比R构型分子能更有效地结合在F191,H237和K238组成的较浅口袋中,这可能是S构型抑制剂活性更高的主要因素,模拟结果与实验数据吻合较好.

摘要：为探究副猪嗜血杆菌同一血清型不同菌株间毒力相关基因的差异以及lpxc基因的遗传特性,本试验设计35种毒力相关基因的特异性引物,对副猪嗜血杆菌血清型4型的两种菌株进行PCR验证,并将两株菌株的lpxc基因连接到T5载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞中进行克隆及测序,得到921bp目的片段。在NCBI上进行比对分析,运用DNA star软件对lpxc基因进行核苷酸同源性比对,同时对lpxc基因编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:35种毒力相关基因中除SapA基因,其余34种在两个菌株中共同存在,两株HPS的lpxc基因序列与各参考菌株之间的同源性均在97%~100%之间,说明lpxc基因在副猪嗜血杆菌中保守存在。系统进化树结果显示XM1602菌株lpxc基因与SH0165菌株处于同一分支,FS0035菌株lpxc基因与ZJ0906菌株处于同一分支。同时,菌株FS0035和XM1602的lpxc基因编码的蛋白质等电点分别为5.59和5.45;该蛋白质为亲水性蛋白,无跨膜结构;二级结构包括α螺旋、伸展链、β转角和无规卷曲。结果证实,同一血清4型,两株不同的副猪嗜血杆菌菌株在毒力相关基因上存在一定的差异;lpxc基因在两个菌株中保守性较高,变异性较低。

摘要：目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(lpxc)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的 Aalpxc 进行异源表达,采用 Zn^2+-NTA 亲和层析、Q-HP 强阴离子交换色谱和 Superose 12 分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对 Aalpxc 进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化。结果获得纯度在 90%以上的超嗜热菌来源的 Aalpxc,经过结晶条件的优化获得分辨率为 1.21 А(1 А= 1 × 10^-10 m)的 Aalpxc 与 ACHN-975 的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为 a = 65.569 А,b = 65.569 А,c = 131.595 А,α= 90.000°,β= 90.000°,γ= 120.000°。结论 ACHN-975 与 Aalpxc 复合物晶体结构的获得有望对 ACHN-975 小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。