摘要：目的探索喷他佐辛对高糖环境下体外培养大鼠视网膜müller细胞的保护作用及其作用机制。设计实验研究。研究对象体外培养的SD大鼠视网膜müller细胞。方法体外培养的SD大鼠视网膜müller细胞分三组:正常对照组(葡萄糖5mmol/L),高糖组(葡萄糖30 mmol/L),高糖+喷他佐辛组(葡萄糖30 mmol/L+喷他佐辛3 umol/L),分别在培养6、12、24、72小时以mTT法检测细胞活性;RT-PCR法检测müller细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)mRNA的表达;蛋白印迹法检测VEGF和ATF4蛋白的表达。主要指标细胞活性,VEGF和ATF4 mRNA和蛋白的表达。结果高糖作用72小时,高糖组与对照组相比细胞活性下降(23.3±0.1)%(P0.05)。结论喷他佐辛可提高高糖作用下体外培养视网膜müller细胞的活性,减少高糖作用下视网膜müller细胞VEGF、ATF4 mRNA和蛋白的表达,具有神经保护作用。

摘要：目的观察糖尿病大鼠视网膜müller细胞谷氨酸转运体(GLAST)、谷氨酰胺合成酶(GS)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化、视网膜神经细胞凋亡的检测以及神经营养因子NT-3的表达,探讨糖尿病(Dm)对视网膜神经细胞损伤的机制。设计实验研究。研究对象Sprague-Dawley(SD)大鼠82只。方法大鼠随机分为正常对照组12只,糖尿病模型组70只。链脲佐菌素诱导实验性Dm大鼠模型。RT-PCR法检测视网膜GFAP mRNA表达水平;TUNEL法检测视网膜神经节细胞(RGC)及内核层细胞的凋亡并计数凋亡细胞数量;免疫组织化学技术LSAB法检测GFAP、GLAST、GS、NT-3在视网膜的表达,观察Dm大鼠视网膜RGC及内核层细胞功能的改变,用图像分析仪测量免疫组化的显色强度。主要指标GFAP、GLAST、GS和NT-3的表达量,视网膜内核层和RGC细胞凋亡数。结果 (1)与正常组(1.00±0.02)相比,模型组GFAP阳性表达量(5.22±1.34)明显增加(P=0.000),GLAST、GS、NT-3阳性表达明显降低。(2)大鼠视网膜凋亡阳性细胞仅见于RGC层和内核层,模型组视网膜内核层细胞及RGC凋亡数量(36.00±6.02,11.48±2.08)比正常组(16.33±2.34,5.34±0.52)显著增加(P均=0.000)。(3)Dm大鼠视网膜GFAP mRNA表达(7.00±0.37)比正常组(0.29±0.08)明显增加(P=0.000)。(4)GFAP阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈正相关(r=0.88、0.85,P=0.021、0.028);GLAST阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.91、-0.89,P=0.014、0.020),GS阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.93、-0.90,P=0.007、0.009);NT-3阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.74、-0.71,P=0.036、0.041)。结论糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡增加与müller细胞的过度反应性增生及神经营养因子的缺失有关,高浓度谷氨酸的兴奋性毒性作用以及神经营养因子NT-3的缺失是其视网膜神经细胞损伤的重要机制。