摘要：目的　调查山东省青岛地区 2 0 0 0 - 2 0 0 3年汉坦病毒的流行情况 ,研究病毒在该地区的分子流行病学特征。方法　采集肾综合征出血热 (HFRS)急性期患者血清标本 6 4份 ,提取血清中病毒RNA作为模板 ,根据GenBank中汉坦病毒基因序列 ,设计HTN型和SEO型的通用外套引物 ,同时分别设计HTN和SEO型的特异性引物作为内套引物 ,RT nest PCR扩增汉坦病毒基因组m片段G1区基因并测序。利用DNAStar软件进行核苷酸序列分析。结果　在 6 4份标本中 ,用HTN型特异性引物扩增出 6份 ,占 9% ;用SEO型特异性引物扩增出 2 5份 ,占 39% ;总阳性率为 4 8%。总体看来青岛地区流行的毒株以SEO为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小 ,其基因的离散率为0.3%～ 8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高 ,其基因的离散率为 2.6 %～ 11.2 %。结论　青岛地区是以SEO型汉坦病毒的流行为主 ,HTN型并存的混合疫区 ;

摘要：为了解2015—2017年闽西地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)遗传进化规律,本研究收集了闽西地区12份PEDV阳性样品,对其m基因进行RT-PCR扩增,克隆至p mD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及遗传进化分析。结果表明,12株闽西毒株m基因氨基酸序列同源性为100.0%;遗传进化分析表明,12株闽西毒株与经典毒株CV777、2010年前中国分离毒株LCZ、以及韩国毒株Sm98、virulent DR13的亲缘性较远,而与2010年后国内分离毒株以及2013年美国分离毒株亲缘关系最近,说明闽西PEDV毒株属于目前国内外流行毒株。分子结构特征分析表明,PEDV m基因具备高度保守的特性,可以作为设计疫苗的候选基因。

摘要：为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒（Nipah virus,NiV）的方法,根据NiV m基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的Taqman-mGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验。结果显示,该方法仅对NiV m基因的RNA标准对照（NiV-m-RNA）发生特异性扩增反应,对猪的其他常见病毒,包括经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型均不发生交叉反应。该方法对NiV-m-RNA的最适线性检测范围为4.6×101~4.6×107 copies/μL,标准曲线方程为y=-3.418x＋37.57,线性相关系数（r2）为0.999,检测下限为4.6copies/μL。对5个不同浓度（4.6×103~4.6×107 copies/μL）的NiV-m-RNA进行双份样品的4次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对368份临床样品进行NiV检测,结果均为阴性。本方法的建立为活猪临床样品中NiV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。

摘要：本研究设计了一对特异性引物NSm1/NSm2,对三株广西狂犬病病毒NS和m基因同时进行了RT-PCR扩增、克隆和测序.同源性分析表明,三株广西野毒NS基因核苷酸同源性为87.2%～98.4%,m基因核苷酸同源性为90.1%～99.7%;与固定毒和狂犬病相关病毒比较,NS基因分别为79.9%～82.8%和69.7%～71.0%;m基因的分别为82.8%～87.8%和75.0%～77.8%.三株野毒NS基因氨基酸同源性为93.3%～98.7%,m基因氨基酸同源性分别为97.5%～100%.表明广西各地毒株之间亲缘关系不同,但最为相近;与狂犬病固定毒株亲缘关系较远;与狂犬病相关病毒亲缘关系最远.

摘要：根据GenBank已登录的PPRV基因组序列,设计并合成2对特异性引物,以PPRV疫苗株基因组为模板,经RT-PCR扩增获得N和m基因并进行序列分析,再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE和Western blot检测。成功克隆PPRV疫苗株N和m基因,重组菌经IPTG诱导后表达分子质量为57.7ku N蛋白(核衣壳蛋白)和38.1ku的m蛋白(基质蛋白),2个蛋白均能与小反刍兽疫阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。

摘要：本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)m蛋白基因序列设计并合成一对引物 ,利用RT_PCR扩增得到了IBV新疆分离株LX4株 (HA价为 2 7)m基因 678bp的片段 ,将该片段克隆到PUC18载体上 ,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger’s双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定 ,获得了IBV_LX4株m基因的核苷酸序列 ,利用DNASIS分析软件 ,将它与GENBANK中发表的 15株国外参考毒株相比较 ,发现核苷酸的同源性 (除D14 66和DE0 72外 )为 85 % ～92 % ,氨基酸的同源性为 83 % ～92 % ,与国内参考株 (H5 2_GD)相比分别为 90 %和 92 % ,确证我们得到的克隆片段为IBV -LX4株的m基因。且含有两个糖基化位点 ,9个高度保守的半胱氨酸 ,三个跨膜区域 。

摘要：依据NCBI所登录的鸡传染性支气管炎病毒的m基因序列设计了一对引物,应用TRIzol试剂盒对8个肾型鸡传染性支气管炎病毒陕西地方分离株进行总RNA的提取,以所得到的RNA为模板,用RT-PCR对m基因进行扩增;其目的条带回收提纯后,与PmD18-T克隆载体进行连接,转化到DH5α宿主菌,并经药物抗性筛选、PCR及酶切鉴定,将所筛选鉴定出的阳性质粒进行测序,最后对测序结果进行分析。结果表明:陕西地方8个毒株(BJ2、FF2、YL2、B01、G5、YX、WH、WG)m基因长约为650 bp,其中YX、WH株本身无BamH 1酶切位点。WH与其它分离株的核苷酸同源性为91.8%～92.6%,而其它的分离株间的同源性为98.8%～99.8%。8个毒株与参考株的核苷酸同源性为74.9%～99.8%。其N端90 aa肽段与对照株相比,不同之处表现为高亲水性氨基酸取代低亲水性氨基酸,这会使其具有更好的抗原性。

摘要：根据GenBank上已公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出去除部分疏水区的PRRSV-m基因,并将其克隆到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-m。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳及Western blot分析,显示重组蛋白分子量约1 5.7 kD,且此蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

摘要：目的:建立麻疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的检测。方法:根据四十年来在我国流行的麻疹病毒m基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立麻疹病毒实时荧光PCR检测方法。用此法对40例麻疹的病人标本进行检测,并与血清学检测结果比较。结果:通过40例病人标本中实时荧光PCR检测,39份阳性,1份阴性,阳性率97.5%,高于血清学检测(阳性率77.5%)。结论:该方法方便快捷、特异性强、敏感性高,可用于麻疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查。

摘要：根据GenBank已发表的传染性支气管炎病毒（IBV）全基因组序列设计引物，对793／B型IBV分离毒株TA03m基因进行克隆与序列分析。结果表明，793／B型IBV的m基因由669bp组成，与GenBank已发表的15株IBV的m基因相比较，793／B型IBV的m基因在第4-15位发生了3-12个核苷酸的缺失，对应1-4个氨基酸的缺失，共有30多处点突变。与其他各毒株m基因的核苷酸同源性为84.2％-93.6％，氨基酸同源性为82.1％-96.0％；进化分析显示TA03株与H52和IBN毒株之间的亲缘关系较近。该研究为进一步探讨793／B型IBVm基因（蛋白）在遗传变异和免疫等方面的作用奠定了理论基础。