摘要：参照GenBank中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR扩增IBV广西株的m基因片段,将其克隆到pmD18-T载体中。序列分析结果表明,m基因全长为678bp,编码225个氨基酸,近N端含有2个潜在的N-糖基化位点,3个跨膜区位于23—98肽段区,亲水区较疏水区更易变异。IBV广西株与国内外IBV参考毒株相比,核苷酸序列同源性为83.6%-92.5%,氨基酸序列同源性为82.7%-95.1%。系统进化分析结果显示IBV广西株与SAIB20和LX4两参考株位于同一个分支上,它们的亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远。结果表明IBV广西株是1株新的IBV变异株。

摘要：根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对m基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp两个条带,弱毒株仅出现375 bp一个条带,其他常见禽病毒为阴性。灵敏度试验结果表明,该方法检测c DNA含量极限为6.15×10^(-4)ng/μL。临床样品检测发现鸡群NDV弱毒带毒率高,中强毒株带毒率较低。结果表明,本研究成功建立了一种基于m基因的快速鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR方法。

摘要：为研究鸡传染性支气管炎病毒（IBV）广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了1株IBV。参照GenBank中IBV的核苷酸序列设计2对引物,利用RT-PCR技术对分离毒株的N、m基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示,N基因序列全长为1 230bp,编码409个氨基酸,m基因序列全长为678bp,编码225个氨基酸。与参考毒株相比,分离株的N基因核苷酸序列同源性为87.2%~93.3%,推导的氨基酸序列同源性为90.0%~94.4%;m基因的核苷酸序列同源性为83.6%~91.0%,推导的氨基酸序列同源性为82.7%~92.9%。在遗传进化树中,本试验分离株Guangxi156株与BJ株和LX4株两个参考株位于同一个分支上,亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远。结果表明,本试验分离株是一株新的IBV变异株。

摘要：根据GeneBank中流感病毒H1N1亚型m基因和NS基因序列,分别设计扩增m基因和NS基因的特异性引物,采用RT-PCR方法扩增猪流感病毒天津株m基因和NS基因,分别将RT-PCR产物克隆至pmD18-T载体,进行序列测定和分析。结果显示m基因全长1027 bp,其核苷酸序列与参考毒株间的同源性在85.8%~99.7%,NS基因全长890 bp,与参考毒株之间的核苷酸序列同源性在80.7%~99.2%。m和NS基因的系统发育树显示：TJ2、TJ4株与我国香港、上海和广东H1N1亚型猪流感病毒属同一分支,但与上海、广东分离株的亲缘关系更近;与2009年全球流行的人甲型H1N1流感病毒变异株和部分国外猪流感疫苗株的亲缘关系相对较远。

摘要：为制备鸭源新城疫病毒m蛋白的多克隆抗体,根据鸭新城疫病毒m基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出m基因,克隆入原核表达载体p ET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下成功表达重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为39 ku。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备重组蛋白的多抗血清,Western blot分析显示,制备的多抗血清能与鸭新城疫病毒感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,m基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的鼠多抗血清可以用于m蛋白的检测。

摘要：以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株的m基因为模板,设计了1对特异性引物,扩增了m基因,经克隆测序后,将该基因序列与NCBI中TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析。将m基因亚克隆至真核表达载体p CAGGS-m-flag中,转染293T细胞,利用flag标签抗体进行Western blot检测分析。结果表明,TGEV HN-2012株的m基因与其他毒株间核苷酸的同源性分别为94.8%~99.0%,与中国其他毒株关系较远。Western blot结果可见大小约为29.5 k D的目的条带,表明m基因成功的在293T细胞中表达。

摘要：本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)m基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高100倍;全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带,而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好,可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。

摘要：根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)m基因序列设计引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增H9N2亚型禽流感病毒m基因,并与GenBank中AIVm基因序列进行了同源性比较和氨基酸编码分析,绘制了m基因的系统发育进化树。结果表明:这6株病毒的m基因的核苷酸同源性在95.9%～99.4%。m1蛋白的同源性在97.6%～99.6%。m2蛋白的同源性在95.1%～100%。进化分析这6株病毒都属于A/Quail/Hong-Kong/G1/97(G1)-like分支。这6株病毒的m2蛋白的第31位氨基酸存在S→N(AGT→AAT)的变异,都具有金刚烷胺的抗性。以106EID50的剂量,将H9N2病毒鼻腔感染BALB/c小鼠,结果表明H9N2亚型流感病毒可以对哺乳动物小鼠可使得体重下降,也可致死。上述结果对于揭示H9N2亚型禽流感流行规律和病毒的致病机理具有一定的意义。

摘要：【目的】建立用于检测禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感(Avianinfluenza,AI)奠定基础。【方法】根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和m基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测。【结果】H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302bp为H1亚型HA基因、453bp为m基因、626bp为H3亚型HA基因;含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带(453bp);而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带。优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00pg的H1亚型AIV、3.62pg的m基因和20.60pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36%,其中H1亚型阳性率4%、H3亚型阳性率9%、其他亚型阳性率23%。【结论】禽流感病毒H1、H3亚型和m基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测。

摘要：【目的】探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)截短m蛋白的序列结构特征与原核表达情况。【方法】根据已公布的PEDV m基因序列设计1对特异性引物,以从阳性病料提取的RNA为模板,通过RT-PCR扩增并克隆PEDV截短的m基因(rm),应用在线生物信息学软件预测rm蛋白的结构特征。将得到的截短的m基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-rm,将鉴定正确的pET-28a-rm转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功构建重组菌株BL21(pET-28a-rm),并对重组菌株进行IPTG诱导表达,优化重组蛋白的表达条件,重组蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE及Western blotting检测,同时应用重组蛋白制备兔抗rm多克隆抗体。【结果】试验克隆得到大小为366 bp的截短的m基因,重组蛋白由121个氨基酸组成,预测蛋白分子质量大小约为12.8 ku。该蛋白的二级结构由无规则卷曲、延伸链、β-转角和α-螺旋组成,占比分别为48.76%、33.88%、9.09%和8.26%。该蛋白不含信号肽,但有跨膜区,包含21个磷酸化位点。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小约为15 ku,以包涵体蛋白形式存在,在37℃、1 mmol/L IPTG诱导12 h时蛋白的表达量最高。Western blotting检测结果表明,重组蛋白与PEDV阳性血清具有较好的反应原性,纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的高免血清效价高于1∶51200。【结论】本研究成功克隆PEDV截短的m基因,对rm蛋白进行了生物信息学分析,获得了高纯度的rm蛋白,为猪流行性腹泻治疗及检测用生物制品的开发奠定了基础。