摘要：【目的】丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是引起病毒性肝炎的重要病原。目前临床HCV感染多采用干扰素联合病毒唑进行治疗,但其应答率低且感染易反复,探索新型抗HCV治疗策略与药物具有紧迫的现实意义。【方法】基于大肠埃希菌来源的核糖核酸酶P(RNase P),针对HCV核心基因的序列,设计一小段与之互补的外部引导序列(Guide Sequence,gs),通过PCR将其共价连接至大肠埃希菌RNase P催化性亚基(m1 RNA)的3'末端,从而构建一种靶向性的核酶——m1gs。【结果】构建的m1gs-HCV/C52核酶在体外可对靶RNA片段产生特异性切割;在HCV感染的Huh7.5.1细胞,该人工核酶也能够显著抑制HCV核心基因的表达,并使培养上清中HCV RNA的拷贝数减少约1500倍。【结论】本研究构建的m1gs-HCV/C52核酶具有显著的体外抗病毒活性,从而为HCV的治疗研究提供了一条潜在途径。

摘要：目的基于大肠埃希菌核糖核酸酶P的催化性RNA亚基(m1 RNA),人工构建一种抗丙肝病毒(HCV)的新型靶向性核酶,并进一步鉴定其胞外靶向切割活性及胞内抗病毒作用。方法首先采用计算机软件对HCV基因组保守区———5'非翻译区(5'UTR)的序列与结构进行分析,以确定候选靶位。针对靶位的侧翼序列,设计与之互补的引导序列(gs),然后通过PCR将其共价连接至m1 RNA的3'末端,从而构建靶向性的m1gs核酶。结果针对HCV 5'UTR第67位的胞嘧啶成功构建了一种m1gs核酶———m1gs-HCV/C67。该人工核酶不仅在体外可对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的宿主细胞内也能够显著抑制HCV核心蛋白的表达(P<0.05),并使上清液HCV RNA的拷贝数减少约800倍(P<0.01)。结论 m1gs-HCV/C67这种新型靶向性核酶具有良好的体外抗HCV活性,其成功构建为HCV感染的治疗研究提供了另一种潜在途径。

摘要：丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝炎的重要病因之一,严重危害公众健康。目前临床HCV感染常采用干扰素联合病毒唑进行治疗,然而应答率不高且易反复。因此,探索新型抗HCV治疗策略及药物显得尤为迫切。针对HCV核心基因的序列,设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,gs),通过PCR的方法将其共价连接于大肠杆菌核糖核酸酶P(RNase P)催化性亚基(m1 RNA)的3?末端,成功构建了一种靶向性m1gs核酶(m1gs-HCV/C141)。经体外切割试验、胞内反义效应及胞内毒性研究,结果表明:m1gs-HCV/C141核酶不仅能够在体外对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的Huh7.5.1细胞中,也能显著抑制病毒核心蛋白的表达,进而使HCV RNA的拷贝数减少约1 000倍。因此,文中构建的m1gs-HCV/C141核酶在体外具有显著的抗HCV活性,这为HCV治疗研究提供了一条新的潜在途径。

摘要：目的针对禽流感病毒(AIV)复制酶PB2亚基的基因构建具有靶向切割作用的m1gs核酶,为新型抗AIV反义药物的开发奠定基础。方法基于大肠埃希菌的核糖核酸酶P(RNase P),根据AIV PB2基因的序列特征,设计一小段与之互补的引导序列gs,通过PCR技术将其共价连接至大肠埃希菌RNase P催化性亚基(m1 RNA)的3'末端,以构建靶向性m1gs核酶。通过体外切割试验测定m1gs核酶的活性。结果构建了m1gs-T_(436)、m1gs-C_(341)两种m1gs核酶。体外切割实验证实,核酶m1gs-T_(436)可对靶RNA片段产生特异性切割;核酶m1gs-C_(341)虽可切割靶RNA片段,但可能属于非特异性切割。结论成功构建并筛选出一种具有显著体外切割活性的m1gs核酶(m1gs-T_(436)),为今后进一步研究其胞内及体内抗病毒活性奠定了基础。