摘要：根据禽流感病毒 (AIV ) A/ Chicken/ Korea/ mS96 / 96 (H9N2 )株的核苷酸序列 ,设计并合成引物 ,通过 RT- PCR,从AIV H9N1株感染的 mDCK细胞总 RNA中扩增出 2 94 bp的 AIV全长的 m2基因。通过软件分析其序列中的跨膜区后 ,将其与p GEm- T easy载体连接产物 p GEm- T/ m2为模板 ,通过 PCR扩增出约 90 bp左右 m2的膜外区编码序列和约 16 0 bp左右 m2的胞内区编码序列。将两个扩增产物同时作为模板 ,以 OE- PCR(overlap extension- PCR)扩增出约 2 5 0 bp的缺失跨膜区的 m2基因m2 d。测序结果表明 ,m2 d的序列除在跨膜区以 4个甘氨酸序列替代外 ,其余部分与 m2完全一致 ,由此说明 OE- PCR扩增法成功地将禽流感病毒

摘要：目的:以人高致病性禽流感H5N1病毒m2蛋白为靶抗原,制备针对H5N1病毒m2蛋白的单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。方法:用针对H5N1病毒m2蛋白胞外区设计的四分肽作为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选出阳性细胞,经多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定。结果:获得10株能稳定分泌抗H5N1病毒m2蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗体效价高,抗原特异性强。结论:成功地获得了针对H5N1病毒m2蛋白的单克隆抗体,为H5N1病毒感染的诊断、治疗及病毒致病机制研究奠定了基础。