摘要：目的:探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在低氧高二氧化碳处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中的表达变化及其与mapk信号通路的关系。方法:酶消化法取雄性SD大鼠PASMCs进行原代培养,采用小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测CLC3蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果:(1)与对照组比较,低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著上调(均P<0.01);(2)与低氧高二氧化碳组比较,ERK抑制剂U0126+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著下调(均P<0.01);p38抑制剂SB203580+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均明显上调(均P<0.01);p38激活剂茴香霉素+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05和P<0.01)。结论:低氧高二氧化碳可上调大鼠PASMCs CLC3 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2通路介导了低氧高二氧化碳诱导的大鼠PASMCs CLC3表达,而p38 mapk通路活化则下调低氧高二氧化碳诱导的CLC3 mRNA和蛋白表达。

摘要：目的:探究氯离子通道阻滞剂尼氟灭酸对低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)的影响及与mapk信号通路的关系。方法:采用大鼠HHPV模型,将所有二级肺动脉环随机分为:常氧组(N组)、低氧高二氧化碳组(H组)、DMSO组(HD组)、尼氟灭酸组(NFA组)、尼氟灭酸+SB203580组(NFA+SB组)、尼氟灭酸+U0126组(NFA+U组),按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定各组肺动脉环的张力变化。结果:NFA+SB组、NFA+U组二级肺动脉环的收缩峰值较HD组均明显下降(P0.05);NFA+SB组的收缩峰值较NFA组明显下降(P0.05)。结论:氯离子通道阻滞剂可通过抑制mapk信号通路,减轻二级肺动脉环II期持续性收缩,并逆转为舒张状态,从而发挥拮抗HHPV的作用。

摘要：昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(mapk)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解mapk信号通路中ERK基因在中华蜜蜂耐寒机制中的作用,从NCBI上面查找意大利蜜蜂的ERK-A的序列,设计引物,以中华蜜蜂为模板,扩增cDNA;利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MEGA 5.2软件中的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建ERK-A与不同物种之间的进化树;通过实时定量PCR分析蜜蜂在4℃环境下ERK-A基因的表达情况。生物信息学分析表明,ERK-A全长1098 bp,编码365个氨基酸。ERK-A的理论分子量是42 kDa,含有ERK-A激酶所共有的磷酸化位点,属于mapk超家族。实时定量PCR检测ERK-A基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,ERK-A基因的表达上调与对照组差异显著(P<0.05),2 h时达到高峰,为对照组的4倍。研究结果表明ERK-A基因是冷响应的,可能在中华蜜蜂应对低温环境时发挥信号转导作用。