摘要：目的:利用实验室构建的微流控芯片对乳腺癌细胞(mda-mb-231)进行捕获,提高捕获率并保证细胞活性,实现再培养。抗肿瘤药物阿霉素处理正常培养和再培养的细胞,分析细胞内的基因表达变化。方法:对微流控芯片进行基底修饰,利用MUC1抗原与抗体特异性结合捕获肿瘤细胞,优化捕获条件提高捕获率。对微流控芯片捕获的细胞进行分离、收集和再培养。用1μmol/L阿霉素对正常培养和再培养的细胞分别孵育24h,然后提取RNA并逆转录合成c DNA。选择乳腺癌细胞中高表达及与肿瘤转移相关的基因FN1、ITGA6和LAmb3设计引物,以c DNA为模板分别进行RT-PCR扩增,对琼脂糖凝胶电泳结果进行灰度分析。结果:经MUC1抗体修饰的微流控芯片能有效地捕获肿瘤细胞,捕获率达80%±3%,释放率约98%,细胞释放后存活率高实现再培养。阿霉素对正常培养和再培养的乳腺癌细胞中FN1、ITGA6和LAmb3的基因表达均有抑制作用。结论:MUC1抗体修饰的微流控芯片能有效捕获乳腺癌细胞并实现再培养,捕获前后细胞内基因表达无显著差异,均能产生药物敏感性。

摘要：为探讨CXCL1基因对三阴性乳腺癌细胞mda-mb-231的迁移、侵袭作用的影响,该研究设计针对CXCL1基因的小干扰RNA,用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定试验分别在RNA和蛋白质水平上检测干扰效率;采用流式细胞术学技术检测细胞的周期和凋亡情况;采用transwell迁移和侵袭试验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。结果显示,与siRNA-NC组细胞相比,siCXCL1-1、siCXCL1-2、siCXCL1-3细胞中CXCL1基因的mRNA和蛋白表达均下调,且si CXCL1-3干扰效率最高,mRNA及蛋白表达水平分别降低了75%(p0.05)。transwell小室迁移和侵袭试验显示,沉默CXCL1基因能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞mda-mb-231的迁移和侵袭能力(p<0.01)。研究成果为临床乳腺癌中以CXCL1基因为靶点的分子治疗提供了理论依据。

摘要：目的构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌mda-mb-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础。方法设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析。化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞。将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒。脂质体法将上述质粒转染至mda-mb-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现mda-mb-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了基因沉默Cbl-b的mda-mb-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础。

摘要：目的:运用RNA干扰技术,观察siRNA表达载体在乳腺癌细胞mda-mb-231中对CaSR基因表达的影响。方法:构建靶向CaSR基因的RNA干扰表达载体,用脂质体转染乳腺癌细胞株mda-mb-231,运用Real-Time荧光定量PCR,Westernblot技术分别从mRNA以及蛋白表达水平检测CaSR基因表达的变化。结果:所构建的质粒载体成功的在mda-mb-231细胞中抑制了CaSR mRNA及其蛋白的表达。与对照组相比,psiRNA-CaSR载体对CaSR mRNA的抑制率达到65%,对CaSR蛋白抑制率约为70%。结论:实验证明所设计的shRNA片段可以有效地抑制CaSR基因的表达,为下一步研究工作奠定了基础。

摘要：背景与目的:人表皮生长因子(human epidermal growth factor,EGF)是受体起作用刺激细胞增殖和分化的重要生长因子。正常细胞的表面有,但很多肿瘤尤其是实体瘤细胞表面则有异常高水平的EGF受体的表毒早期区4第4编码蛋白,即腺病毒E4orf4蛋白(adenovirus early region ding frame 4 protein)可以特异地诱导肿瘤细胞发生不依赖p53表达的种新型的细胞毒因子。本研究旨在利用EGF的靶向性和E4orf4蛋白的,在分子水平设计合成一个融合蛋白。

摘要：目的:探讨miRNA-210(miR-210)在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞mda-mb-231增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞mda-mb-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用Lipofectami-neTM2000将miR-210 inhibitor转染至mda-mb-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测mda-mb-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。结果:miR-210在乳腺癌组织和mda-mb-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞(P<0.01)。miR-210 inhibitor成功转染mda-mb-231细胞,转染效率为(88.29±2.98)%,转染miR-210 inhibitor后mda-mb-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱(P<0.05),被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多[(64.23±3.12)%vs(55.53±0.96)%,P<0.01],凋亡细胞比例也显著增加[(31.90±3.05)%vs(15.98±0.63)%,P<0.01],细胞的迁移[(291.00±43.12)vs(1137.38±83.49)个,P<0.01]、侵袭[(131.63±32.01)vs(647.88±31.20)个,P<0.01]均受到明显抑制。结论:miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞mda-mb-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。

摘要：目的探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白1(cAMP-response element binding protein 1,CREB1)基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7和mda-mb-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和mda-mb-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组,同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western印迹法检测转染效率;CCK-8法检测细胞增殖能力;集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果相较于阴性对照组,shCREB1#1和shCREB1#2组MCF-7和mda-mb-231细胞CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.001)。沉默CREB1后,MCF-7和mda-mb-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱,且凋亡率升高(P<0.05)。沉默CREB1使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达下调,而使促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达上调(P<0.05)。结论沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并诱导其凋亡。