摘要：目的利用错配杂交和化学发光技术,建立一种检测mgmt基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法基因组DNA经过亚硫酸氢钠修饰,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计特异的PCR引物(不含CpG位点),同时扩增含有CpG位点甲基化或非甲基化目的 mgmt基因启动子区,用两条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物杂交,化学发光检测,通过两条探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中mgmt甲基化的程度。结果检测混合样品中mgmt基因的甲基化水平与结果完全相符,并可用于肿瘤组织样品的mgmt甲基化定量检测。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的mgmt基因甲基化的定量检测方法。

摘要：目的在许多肿瘤中发现启动子区过甲基化而导致O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(mgmt)的转录失活,本研究拟从胶质瘤患者肿瘤组织和其对应血清中mgmt基因启动子过甲基化是否有一致性对mgmt基因启动子甲基化进行研究。方法采用甲基化特异性PCR法(MSP)进行mgmt基因启动子区甲基化水平的检测。结果27例胶质瘤组织中有14例(51.9%)mgmt甲基化扩增阳性,13例(48.1%)为mgmt去甲基化扩增阳性。相应的血清中有13例(48.1%)mgmt甲基化扩增阳性,14例(51.9%)mgmt去甲基化扩增阳性(P<0.05)。结论胶质瘤患者肿瘤组织和其对应的血清中mgmt基因启动子甲基化状态具有显著相关性。测定血清中mgmt基因启动子区的甲基化状态能反应胶质瘤组织中mgmt基因启动子区甲基化状态。MSP是检测mgmt基因启动子区甲基化灵敏和可靠的方法,可以指导临床脑胶质瘤的个体化化疗方案的设计。

摘要：目的了解我国实验室开展甲基化相关肿瘤标志物检测的总体情况,调查对象为Septin9基因、mgmt基因以及其他相关基因,调查内容包括检测方法和范围、检测试剂和样本,以及分析性能等。方法国家卫生健康委临床检验中心设计Septin9基因、mgmt基因及其他相关基因甲基化检测的调查问卷,调查实验室开展检测的范围及方法、试剂及厂家、样本类型及要求、性能验证和性能确认的情况。2022年5月向全国24个省(自治区、直辖市)的125家实验室发放了调查问卷,并对回报结果进行统计分析。结果125家实验室包括68家医疗单位和57家独立医学实验室。67家实验室填写了Septin9基因,18家实验室填写了mgmt基因,54家实验室填写了其他相关基因,包括SDC2、SHOX2、RASSF1A、GSTP1、RNF180、MLH1、PAX1基因。基于PCR的方法是甲基化检测的主要手段,分别占Septin9基因、mgmt基因和其他基因甲基化检测的97.0%(65/67)、66.7%(12/18)和100.0%(54/54)。Septin9基因甲基化检测范围在启动子V2转录本CGI3区域,且涵盖3个以上CpG位点;mgmt基因甲基化检测范围在启动子DMR1和DMR2区域,涵盖4个以上CpG位点。Septin9基因甲基化检测试剂包括3种中国国家药品监督管理局(National medical products administration,NMPA)批准的商品化试剂(54/67,80.6%)和12种实验室自建试剂(Laboratory-developed tests,LDTs)(13/67,19.4%);mgmt基因甲基化检测试剂包括1种NMPA批准的试剂盒和14种LDTs,主要为实验室自建方法。97.0%(65/67)的Septin9基因甲基化检测采用血浆样本(2~10 ml);88.9%(16/18)的mgmt基因甲基化检测采用新鲜组织或福尔马林固定石蜡包埋组织切片样本(肿瘤细胞含量>10%)。有89.6%的Septin9基因甲基化检测实验室采用磁珠法以及61.1%的mgmt基因甲基化检测实验室采用离心柱法进行DNA提取。所有参与实验室均进行了DNA亚硫酸氢盐转化及纯化。有88.1%的Septin9基因甲基化检测实验室和61.1%的mgmt基因甲基化检测实验室在检测过程中使用了阴性/阳性质控品,有82.1%的Septin9基因甲基化检测实验室和72.2%的mgmt基因甲基化检测实验室做过试剂的性能验证或性能确认。98.5%的Septin9基因甲基化检测实验室的最低检出限(The limit of detection,LOD)为0.1%~10%的甲基化DNA水平或35~80pg/ml的甲基化DNA浓度;72.2%的mgmt基因甲基化检测实验室的LOD为1%~20%的甲基化DNA水平。结论我国实验室在Septin9基因和mgmt基因甲基化的检测方法及范围、检测试剂及样本方面存在差异,为了保证检测结果的准确可靠,各实验室应规范开展性能验证和性能确认工作,积极优化检测流程,进一步完善质量保证措施。