摘要：根据编码mic3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码mic3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入***5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入***21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果显示,扩增的mic3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6%,表达的mic3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。

摘要：目的 克隆和表达弓形虫微线体蛋白mic3基因。方法 从弓形虫RH株分离总的RNA,反转成cDNA.根据mic3基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫cDNA中扩增mic3基因片段,插入pGEM-T载体,并转化大肠杆菌Top10,经PCR、双酶切、测序验证后,将mic3基因片段定向亚克隆到载体pET-28a中构建原核表达重组质粒pET-28a-mic3,重组子在*** BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出792bp大小的mic3基因片段并诱导表达27 300 Mr的重组mic3蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pET-28a-mic3重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究莫定了基础。