摘要：目的采用生物信息学方法预测和鉴定白血病相关抗原mlaa-34 HLA-A2+限制性CTL表位,探索基于mlaa-34为靶标的白血病免疫治疗的可能性。方法采用超基序法和量化基序法对靶抗原mlaa-34 HLA-A2+限制性CTL表位进行预测;选取评分较高且排位在前10位的抗原表位肽为候选表位肽,并进行人工合成。利用T2细胞,以肽结合试验及流式细胞术检测各候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光指数(fluorescence index,FI)表示];选取亲和力较高的4种多肽进行特异性CTLs的体外扩增,同时用LDH释放法对CTLs的活性进行检测。结果预测的前10位候选mlaa-34 CTL表位肽中,mlaa2(ILLKNQPKL)、mlaa3(LLTRHKVLV)、mlaa5(LLVTLI-ADL)和mlaa9(YLIKQIRDL)具有较高的亲和力,其FI分别为1.65、1.73、1.82、1.02,可作为候选表位肽进一步分析。细胞毒实验分析显示,mlaa5(LLVTLIADL)可在体外有效诱导特异性CTLs的产生,杀伤靶细胞。结论 mlaa5(LLVTLIADL)为白血病相关抗原mlaa-34的HLA-A2+限制性CTL表位,为基于mlaa-34的治疗性多肽疫苗的设计制备奠定了基础。

摘要：目的构建pIRES2-mlaa34-HSP70重组质粒,并检测其免疫效果。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法提取急性单核细胞白血病相关抗原基因mlaa-34和热休克蛋白(HSP)70基因,设计特异性重叠引物,以重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增mlaa34-HSP70融合基因,构建核酸疫苗pIRES2-mlaa34-HSP70。将核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠脾淋巴细胞对U937细胞的杀伤作用及小鼠脾细胞悬液中白细胞介素(IL)-2、IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平。结果扩增出mlaa34-HSP70融合基因2 956bp,成功构建了核酸疫苗pIRES2-mlaa34-HSP70,经鉴定与预期结果一致;脾淋巴细胞杀伤活性结果显示,核酸疫苗pIRES2-mlaa34-HSP70对U937细胞的杀伤效率明显高于其他实验组及对照组(P<0.01);核酸疫苗pIRES2-mlaa34-HSP70组细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ水平亦明显高于其他实验组及对照组(P<0.01)。结论成功构建了pIRES2-mlaa34-HSP70核酸疫苗,该核酸疫苗能诱发强烈的体液免疫,增强机体对肿瘤细胞的免疫应答,对mlaa34阳性细胞具有特异性杀伤作用。