摘要：随着信使RNA(messenger ribonucleic acid,mrna)的核苷酸化学修饰和递送技术的不断发展和完善,mrna疫苗技术在传染病预防和癌症治疗中显示出了超乎预期的效果。2023年,Katalin Karikó及Drew Weissman因为在核苷酸碱基修饰助力mrna疫苗成功研发方面的突出贡献荣获了诺贝尔生理学或医学奖。本文对近年来非复制型mrna疫苗研究在降低mrna诱导免疫反应、提高mrna稳定性、提升抗原表达效率、递送系统开发等方面的最新进展予以综述,以期为研究人员提出全新的概述,并且助力mrna疫苗在更多传染性疾病乃至肿瘤防治中得到广泛应用。

摘要：为构建一种非复制型mrna平台并探究电穿孔介导的mrna对小鼠健康状况的影响及蛋白的表达情况,以荧光素酶作为靶标基因,用T7 RNA聚合酶体外转录及酶法加帽加尾的策略制备mrna,用活体基因导入仪通过电穿孔的方式体内递送mrna,借助小动物活体成像系统观测荧光素酶蛋白在小鼠体内的表达强度和持续时间。结果表明,使用该非复制型mrna平台得到的mrna成功在体内外表达,电穿孔介导的mrna对小鼠健康体征无明显影响,所有的小鼠均成功表达了荧光素酶蛋白,蛋白表达在电穿孔后第1天达到峰值,在第4天迅速下降,但蛋白表达强度和持续时间存在较大的小鼠个体间差异。研究对非复制型mrna的构建及其应用于疫苗或肿瘤药物研发具有重要参考价值。

摘要：目的运用生物信息学方法分析构建E2F1对微RNA(miRNA)的转录调控进而影响下游靶基因mrna的转录因子网络,从而探讨E2F1通过miRNA参与肿瘤发生发展的机制。方法基于TCGA数据库筛选存在E2F1上调表达的肿瘤组,检索存在E2F1差异表达的20种肿瘤组织中差异表达的miRNAs。分析差异表达miRNAs的靶基因,并与差异表达mrnas取交集以构建E2F1-miRNA-mrna调控网络,对靶基因进行富集分析(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,构建蛋白质相互作用网络,讨论E2F1调控miRNA及其靶基因,进而影响肿瘤发生发展的生物机制。结果通过生物信息学方法分析构建的TF-miRNA-mrna调控网络,展现了miR-7,miR-9,miR-17,miR-21,miR-22,miR-24并调节micoRNA in cancer信号通路。结论E2F1转录因子在多种癌症中起促癌作用,本研究为泛基因组癌症的早诊与设计治疗药物提供了潜在的靶点。

摘要：目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mrna表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mrna全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mrna的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mrna设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol.L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mrna表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela细胞Ku70mrna的表达。

摘要：持续3年的新冠疫情让mrna技术声名远扬,更让人们见识到了核酸疫苗技术在应对流行疾病中所起到的重要作用。mrna能将药物发现从小分子化合物、功能性蛋白质拓展到基因层面,通过特异性引入外源基因的体内表达,实现高效安全的新一代疫苗设计,同时可被用于攻克尚无药物可治疗的疾病,包括遗传疾病和其他难治疾病。

摘要：通过设计可以引发特定mrna进行转录的特异引物，采用了一种新的原位反转录的方法检测mrna，这种原位反转录的方法是把原位杂交和反转录进行有机结合的结果，其实用性能和关键步骤都已进行优化。研究表明，只要设立合适的对照原位反转录方法，检测mrna的灵敏度高、假阴性和假阳性率低。用这种方法对一个属于AGL2亚组的水稻(Oryza sativa L．)的MADS-盒基因M79的表达进行了分析，结果表明，在水稻从营养到生殖的各个发育阶段，M79均有表达，与平行进行的传统原位杂交的方法得到的结果类似。相对而言，原位反转录法耗时短、容易操作，可以成为一种可靠的原位定位mrna的基本技术。

摘要：目的　建立测定IFN γmrna和IL 4mrna和RT 竞争PCR方法 ,探讨体外诱生条件并作临床初步应用。方法　用自行设计和制备的IFN γcDNA和IL 4cDNA竞争模板 ,作RT 竞争PCR ,对健康人经PMA和calciumionophore(钙离子载体 )诱导的PBMC、11例健康人和 13例哮喘患者PBMC作IFN γmrna和IL 4mrna定量测定。结果　在建立了准确的定量测定mrna方法的基础上 ,确认在calciumionophore 2 .0 μmol/L浓度时 ,用PMA 10 0ng/ml诱导 6h或PMA 80ng/ml诱导 7h ,IFN γmrna或IL 4mrna表达分别达最高水平 ,两种细胞因子mrna在健康人PBMC中不表达 ,而在 10 /13例和 11/ 13例哮喘患者中分别呈不同程度的表达 ,其中IL 4mrna表达水平高于IFN γmrna。结论用自行设计和制备的竞争模板经RT 竞争PCR法可对细胞内IFN γmrna和IL 4mrna作较准确的定量测定 ,方法简便且敏感 ;健康人PBMC需经一定条件刺激方可表达两种细胞因子mrna ;多数哮喘患者PBMC不经刺激即可表达两种细胞因子mrna ,IL 4mrna表达水平高于IFN γmrna ,提示本法可用于研究细胞因子基因表达和哮喘等患者细胞因子变化动态。

摘要：本文设计了两对特异性引物，用聚合酶链反应法（PCR）检测肝细胞癌病人静脉血中微量癌细胞的甲胎蛋白mrna，PCR反应后出现与已知序列相符的101bp条带，并用Pstl限制性内切酶消化确认其特异性。该方法灵敏度达0．01fg重组DNA，在5ml静脉血中有1～10个癌细胞即可检出，且重复性好，可用于判断肝癌的早期转移。

摘要：人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类感染人体的皮肤粘膜并引起乳头状瘤病变的病毒。目前发现的HPV已有63型,不同型的HPV引起人体不同部位的病变。HPV 16主要与生殖系统的肿瘤尤其是子宫颈癌有密切关系。

摘要：基因mrna的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mrna末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mrna通过3’末端得到固定,保持mrna的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mrna的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mrna的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值.