摘要：目的　研究锤头状核酶对雄激素受体 (AR)mrna片段的体外切割活性 ,探讨抗雄激素基因治疗的新途径。方法　计算机模拟ARmrna片段二级结构 ,选择第 10 18位GUC为核酶切割位点 ,设计特异性切割AR的锤头状核酶 (RZ) ,合成含T7启动子的核酶和底物模板链 ,体外转录RNA ,37℃条件下行核酶体外切割反应。结果　核酶在体外 37℃反应 1h ,可将 98%的底物RNA ( 2 5 5nt)切割为 16 8nt和 87nt2个片段。结论　特异性切割AR的锤头状核酶在体外对底物RNA有良好的切割活性 ,为应用核酶阻断雄激素受体基因表达奠定了基础。

摘要：目的：检测原发性肝癌患者外周静脉血中游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ，探讨其能否反映肿瘤的侵袭转移潜能。方法：应用敏感的ＲＴ－ＰＣＲ方法，通过合理的ＰＣＲ引物的设计，检测了１５例原发性肝癌患者术晨的外周静脉血中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ，结果：从６例患者外周静脉血中选择性地检测出了游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ．结论：外周静脉血中游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ可能从一个侧面反映了肿瘤的侵袭转移潜能，此法有可能作为恶性肿瘤监测及诊断的辅助手段。

摘要：根据前列腺分泌蛋白 94(PSP94)和PSP5 7的基因结构特点 ,设计并合成了以地高辛标记的两条探针 ,利用组织原位杂交的方法 ,对增生和癌变前列腺组织中PSP94mrna的表达量进行了比较。结果显示 ,2 0例增生前列腺组织 ,有 1 0例PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号比PSP94特异探针杂交信号强 ,1 0例相反。它们的共同点是均以腺体增生为主。而 7例前列腺癌组织中除 1例外 ,其余 6例PSP94特异探针的杂交信号均比PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号强。增生和癌变前列腺组织杂交结果比较 ,癌变前列腺组织PSP94特异探针杂交信号均比增生前列腺组织强。

摘要：目的:探讨K-Cl共转运体1(K-Cl cotransporter 1,KCC 1)mrna在子宫内膜癌组织中的表达及小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)干扰其表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法:应用荧光定量PCR的方法检测正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCC 1 mrna的表达。设计并合成KCC 1特异性的siRNA,转染子宫内膜癌HEC-1B细胞后,应用RT-PCR、Western印迹法、MTT法和FCM法分别检测HEC-1B细胞中KCC 1 mrna和蛋白的表达、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:子宫内膜癌组织中KCC 1 mrna的表达较正常子宫内膜组织明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。KCC1特异性siRNA能明显抑制HEC-1B细胞中KCC1 mrna和蛋白的表达(P<0.05),且HEC-1B细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞周期分析显示细胞明显阻滞于G0/G1期,与对照组比较,细胞凋亡增加(P<0.05)。结论:KCC1基因与子宫内膜癌有关,参与细胞周期的调节,具有促进细胞增殖的能力。

摘要：探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测两种培养系统中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mrna的表达。结果显示 ,虽然二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞形态不同 ,但二维和三维培养的成纤维细胞均有VEGF/bFGF设计大小的条带显示 ,且两者条带相对灰度无明显差异。

摘要：目的建立荧光实时定量RT—PCR（FQ—RT—PCR）检测前列腺癌（PCa）特异基因DD3mrna的方法。方法在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条TaqMan—MGB探针，优化反应体系，建立DD3mrna的FQ—RT—PCR方法，并进行方法学评价。将PCR扩增产物经凝胶电泳纯化后与pBluescript Ⅱ SK载体连接，再将重组质粒转化感受态细胞进行克隆；提取重组质粒在紫外分光光度计上定量，作为定量检测的标准品。结果重组质粒经PCR扩增及序列测定，表明pBluescriptⅡSK—DD3cDNA克隆成功。PCR扩增产物经测序分析证实为DD3 mrna特异性片段。本法灵敏度为6拷贝／反应，线性范围为6～6×10^8拷贝／反应，相关系数为0．9985，批内、批间变异系数分别为1.0％～2.0％和1、3％～6、6％。结论成功建立了FQ—RT—PCR检测DD3mrna的方法。为DD3 mrna作为前列腺癌的诊断指标提供了方法学依据，也为其他肿瘤基因的检测提供了方法学启示。

摘要：目的观察外周血中癌胚抗原（ＣＥＡ）分泌性肿瘤标志基因的表达。方法设计特异的引物，用逆转录ＰＣＲ方法检 测正常人及肿瘤病人外周血有核细胞成分中的 ＣＥＡ ｍＲＮＡ。结果 ４６例肿瘤患者中有 ２５例检出 ＣＥＡ ｍＲＮＡ，阳性率 为５４．３５％；正常对照者 １２例均阴性。肿瘤临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的患者血清ＣＥＡｍＲＮＡ检出率明显高于Ⅰ、Ⅱ期的病人 （Ｐ＜０．０５）。 ＣＥＡ ｍＲＮＡ阳性率与血清 ＣＥＡ水平无显著性关系（Ｐ＜０．０５）。临床有远处转移者 ＣＥＡ ｍＲＮＡ阳性率明显高 于无远处转移者（Ｐ＜０．０５）。对临床无远处转移征兆，而 ＣＥＡ ｍＲＮＡ检测阳性的 １２例患者进行半年的随访，３例出现脏 器的转移。结论外周血标志基因检测是肿瘤微转移检测的灵敏方法。ＣＥＡｍＲＮＡ阳性率与肿瘤临床分期正相关，与肿 瘤的远处转移密切相关，而与血清ＣＥＡ水平无显著性关系。血中标志基因阳性可能提示肿瘤的早期转移。

摘要：受医院床头牌的启发，笔者设计制作了氨基酸信息速查盘。教学实践证明，该教具对教师传授及学生掌握氨基酸的结构通式、种类，领会氨基酸密码子、反密码子、tRNA、mrna间的关系非常有帮助。现就其制作、使用及特点加以叙述。

摘要：目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786-0细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67mrna、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。

摘要：mrna靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mrna上可接近位点以确定靶位点的方法 ,包括mrna实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mrna实测分析法又包括多种针对自然折叠mrna的实验分析技术 ;即基因walk技术 ,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术 ,酶作图法确定二级结构技术 ,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。