摘要：目的:分析设计抗菌肽magaininⅱ多拷贝串联体表达质粒并进行构建验证。方法:根据GeneBank中提供的抗菌肽magaininⅱ氨基酸序列,结合表达菌株毕赤酵母密码子偏爱性,设计出magaininⅱ的表达序列,并于其两端插入一对同尾酶SalⅠ和XhoⅠ的酶切识别序列及裂解位点AGA,人工合成后插入质粒载体pUC19中,利用同尾酶法构建抗菌肽magaininⅱ多拷贝串联体。结果:经M13引物进行PCR及SalⅠ/PstⅠ双酶切进行鉴定,成功构建出抗菌肽magaininⅱ1-5拷贝串联体重组质粒。结论:该研究设计的magaininⅱ串联体构建方法可行。

摘要：目的将克隆的抗体轻重链可变区基因拼接成单链抗体基因并将其在大肠杆菌中表达。方法通过RT—PCR从两株抗magaininⅱ杂交瘤细胞株 (2D1 ,3F8)中克隆出VH 和VL 基因 ,然后利用重组PCR技术 ,将VH 和VL 基因通过柔性肽段(GLY4Ser)3 的Linker拼接成单链抗体基因(ScFv) ,将ScFv克隆到表达载体 pCANTAB5E上并将其分别在大肠杆菌***2151及TG1 中进行表达。结果SDS PAGE和Western blot分析表明 ,ScFv在大肠杆菌***2151中得到了分泌表达。间接ELISA结果显示可溶性ScFv及其表面展示噬菌体均具有抗原结合活性。结论成功地获得了ScFv 2D1和ScFv 3F8基因并在大肠杆菌中得到了功能性表达 ,为新型抗菌肽的设计打下了基础。