摘要：本期杂志中，我最喜欢的文章是《我们为什么要组织？》，读得比较过瘾！政党、军队、企业是实体组织，派别、圈子是虚拟组织、无论是人、单位、组织都回避了对价值观的回答。什么是价值观？翻开以前的好多种版本的CIS书籍，谈得很透的文字不多，因此我们看到的是设计师笔下大量COPY出来的“团结”、“拼搏”、“求实”、“创新”mi理念。

摘要：目的:探索CRISPR干扰(CRISPR interference,C R I S P R i)能否实现在体抑制肝脏m i R-122表达.方法:针对m i R-1 2 2启动子区设计sg RNA(sg T1和sg T2),并分别将其与无DNA切割活性仅保留识别活性的d Cas9-KRAB载体通过尾静脉流体力学法注射到8-10 wk龄小鼠,注射1、2、4 wk后通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)方法检测肝脏mmu-mi R-122的表达;设计不同的sg RNA浓度梯度,探索CRISPRi在体抑制肝脏mi R-122表达是否存在剂量依赖性;通过q RT-PCR及Western blot方法检测肝脏mi R-122靶分子HOMX1和Cyclin G1的表达变化.结果:在注射1 wk和2 wk后,sg T1介导的C R I S P R i在体抑制肝脏m i R-122的表达水平分别为23%(P<0.05)和16%(P<0.05);随sg RNA的剂量升高,肝脏mi R-122表达降低,当lenti Guide-Puro-sg T1质粒为120?g时,可将mi R-122的表达抑制约30%;CRIPSRi在体抑制肝脏mi R-122表达的同时,上调了mi R-122下游靶分子HMOX1和Cyclin G1的表达.结论:本研究利用CRISPRi实现了在体抑制肝脏mi R-122的表达,为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)的在体治疗提供了新的策略.

摘要：目的:探索CRISPR干扰(CRISPR interference,CRISPRi)特异性抑制肝癌细胞Hep G2内源性miR-122表达.方法:设计靶向mi R-122启动子区TATA盒和转录起始位点(transcription start site,TSS)的sg RNA(sg T1和sg T2),与无DNA内切酶活性仅保留识别特性的d Cas9-KRAB载体共转染Hep G2细胞,通过实时定量PCR(quantitative Real-time PCR,qR T-PCR)方法检测miR-122的表达并确立有效的sgR NA;设计不同的sgR NA浓度,探索CRISPRi抑制作用的剂量依赖性;通过qR T-PCR及Western blot方法检测miR-122靶分子HOMX1和CyclinG 1的表达变化.结果:sg T1和sg T2介导的CRISPRi分别将肝癌细胞Hep G2内源性mi R-122的表达水平抑制5.5倍(P<0.01)和3.7倍(P<0.01);CRIPSRi抑制效应是sgR NA剂量依赖性的,当lentiG uidePuro-sgT 1质粒为500 ng时,可将miR-122的表达抑制10.0倍(P<0.01);CRIPSRi抑制肝癌细胞Hep G2内源性mi R-122表达的同时,上调了mi R-122下游靶分子HMOX1和Cyclin G1的表达.结论:本研究利用CRISPRi技术实现了对肝癌细胞Hep G2内源性mi R-122表达的特异性抑制,为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)提供了全新的策略.

摘要：目的:观察miR-214对人结肠癌细胞株LoVo中轴突导向因子4D(semaphorin 4D,Sema4D)表达水平的影响,探讨miR-214对Sema4D的调控作用.方法:设计并合成miR-214模拟物(miR-214mimics),miR-214抑制剂(miR-214 inhibitor),二者对照序列(mi-control,in-control),分别与以脂质体lipofectamine 2000包裹后转染人结肠癌细胞株***-PCR检测转染24 h后各细胞株内miR-214的表达及Sema4D mRNA的表达变化,并用Western blot检测Sema4D蛋白的表达变化.结果:LoVo细胞株转染miR-214 mimics、mi-control,inhibitor、in-control 24 h后miR-214的相对表达量为8.003±0.651,3.464±0.332,0.740±0.088,2.620±0.166,mimics组miR-214表达较其对照组升高,inhibitor组表达较其对照组降低(P<0.05).Sema4D mRNA的相对表达量为:0.420±0.027,0.851±0.062,1.243±0.087,0.660±0.042;Sema4D蛋白/β-actin分别为:0.163±0.037,0.550±0.038,1.137±0.112,0.457±***4D mRNA及蛋白mimics组表达较其对照组降低,inhibitor组较其对照组升高(P<0.05).结论:人结肠癌细胞株LoVo中,Sema4D受miR-214的调控,miR-214可负向调控Sema4D mRNA的表达水平进而影响其蛋白的表达,miR-214可能作为结肠癌治疗的新靶点.