摘要：目的检测新疆伊犁地区天然牧场放养马群脑组织中亨德拉病毒(Hendra Virus,HeV)的核酸片段,调查该地区马群中枢神经系统HeV感染流行状况。方法针对HeV高度保守区核蛋白(n)基因设计特异性引物和探针,采用一步法实时荧光定量RT-PCR检测中枢神经系统感染样本中低浓度HeV RnA的方法,检测新疆伊犁草原地区天然放养且未接种HeV疫苗的183例马匹脑组织。结果最低特异性检出浓度可低至2.6×102copies/μL,与其他单股负链RnA病毒如同属的尼帕病毒(niV)无交叉反应,对183例马脑组织进行一步法实时荧光定量RT-PCR检测,未检出阳性样本。结论初步流行病学研究尚未发现我国新疆伊犁地区天然牧场放养马匹中存在HeV感染的证据,提示该地区短时间内爆发亨德拉病毒感染的可能性小。

摘要：为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenB ank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC2的n基因序列,设计一对引物,扩增n基因,将目的基因与载体pE T-32a(+)连接,构建重组表达质粒pE T-32a-n,转化*** BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pE T-32a-n,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV n基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2μg·孔^(-1),血清最佳稀释度为1:200,临界值为D450值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的n-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV n蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。

摘要：2017年11月,华南某猪场新生仔猪出现急性呕吐和严重水样腹泻、体重迅速减轻和急性死亡,病死率90%～100%。经实验室PCR诊断,排除猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)等常见腹泻传染病后,诊断为猪急性腹泻综合征(Swine acute Diarrhoea Syndrome, SADS),由一种新型的蝙蝠冠状病毒(SADS-CoV)引起。针对其编码的n基因设计一对特异性引物扩增该片段并测序,使用DnA Star和MEGA 7.0软件进行同源性分析。结果:成功克隆了该病毒的n段基因,序列长度为1 155 bp,进行了基因测序和遗传进化分析,序列同源性分析确证该毒株属SADS-CoV,命名SADS-CoVHn17。

摘要：本文以IBV n蛋白为研究对象,首先从鸡胚培养的IBV ZY3毒株尿囊液中提取基因组RnA,然后利用软件对其n蛋白抗原表位进行预测分析,设计一对特异性引物对免疫原性好、亲水性强、表位可能性大的保守片段进行扩增,片段大小为818 bp;将扩增产物与表达载体pET-32a(+)连接并转入大肠杆菌BL21中诱导表达,用SDS-PAGE检测表达的重组n蛋白大小为50 kDa;用ni-nTA Superflow纯化重组n蛋白后,采用抗鸡IBV血清与之进行Western blot反应,检测其免疫原性,结果显示重组蛋白免疫原性良好。该结果对进一步研究IBV n蛋白及建立鸡传染性支气管炎的诊断方法有重要意义。

摘要：根据Gen Bank报道的n基因高度保守核苷酸序列,设计并合成一对引物。上下游引物与Gen Bank中登录的153株猪流行性腹泻病毒(PEDV)n基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板,利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增,获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照,建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验,变异系数<0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证,核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点,可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。

摘要：根据已报道的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)基因序列设计了 1对可用于扩增不同病毒株n基因片段的引物 ,得到了预期的 438bp长的产物 ,并将此RT PCR方法与鸡胚盲传法结合用于分离、检测IBV。分离病毒的扩增条带经纯化和回收以后 ,克隆到pMD18 T质粒载体中。在对插入片段进行序列测定后 ,我们将测序结果与已发表的IBVn基因序列进行了比较 ,证实具有极高的同源性 ,表明分离的是IBV。据此建立起一种更加快速、有效的分离、鉴定IBV的方法。

摘要：将本室鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)江苏省地方分离肾型毒株JS/ 95 / 0 3接种鸡胚 ,分离、纯化病毒 ,提取单股RnA做为反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的扩增模板。用Genbank公开序列多重比较后设计一对引物 ,使用单管RT PCR方法 ,特异扩增IBV核蛋白 (n)基因 5’端 85 4bp的片段。扩增产物纯化后测序 ,序列分析表明 ,IBVn基因也存在较大变异 ,此毒株与呼吸型疫苗株M

摘要：从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株病毒。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶-2-脱氧核苷抑制，表明毒株的核酸类型为DnA；对乙醚和氯仿有抵抗力；耐酸不耐碱；对热敏感。根据已发表的I群禽腺病毒hexon基因的保守区域设计合成了2E引物。用这2对引物对4株病毒的核酸模板进行PCR扩增，结果均扩增出与设计片段大小一致的片段。测序分析表明，4株分离株为I群禽腺病毒。用本实验室自制的I群禽腺病毒12个血清型参考毒株的抗血清进行双向琼脂扩散试验，证明4株病毒中1株为血清2型，其余3株为血清8型。

摘要：根据同源序列克隆原理设计一对引物，以绵羊脑组织总RnA的反转录产物为模板，利用RT—PCR扩增绵羊noggin基因eDnA全长编码区，克隆到pMD-18T载体。测序验证后，提取pT—noggin质粒经BamHI和XhoI双酶切回收目的条带，亚克隆到pET41a原核表达载体，转化BL21（DE3）菌，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。