摘要：目的设计合成靶向nf-κb的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向nf-κb的哑铃形诱骗剂对nf-κb转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对nf-κb转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中IL-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对IL-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制nf-κb与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达IL-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及IL-6的活性均有抑制作用。结论靶向nf-κb的诱骗剂ODN在体外可抑制nf-κb的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中IL-6的表达。

摘要：目的探讨缺氧对人真皮Fh向肌Fh表型转化的影响及其机制。方法取对数生长期第3代健康成人真皮Fb，用含体积分数10％FbS的DMEM培养基培养，进行以下5项实验。（1）实验1、2、3均将所取细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组，每组10皿。常氧组细胞于含体积分数21％氧气环境中培养，缺氧组细胞于含体积分数1％氧气环境中培养。培养0、48h，2组分别取5皿细胞，实验1用实时荧光定量RT—PCR法检测细胞中肌Fh标志物α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达，实验2用蛋白质印迹法检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达，实验3用蛋白质印迹法检测细胞中nf-κb蛋白表达。（2）实验4将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组，每组5皿。前2组细胞同实验1处理，缺氧＋PDTC组细胞同缺氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中nf—κb蛋白表达。（3）实验5将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋PDTC组、常氧＋PDTC组，每组5皿。前3组细胞均同实验4处理，常氧＋PDTC组细胞同常氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD—t检验。结果（1）与常氧组相应时相点比较，缺氧组Fb培养0h时α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及nf-κb蛋白表达量均无明显变化（t值为-1．21～2．04，P值均大于0．05），培养48h时α—SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及nf—κb蛋白表达量均显著升高（t值为-12．57～-3．44，P值均小于0．01）。（2）培养48h，缺氧组Fh中nf—κb的蛋白表达量为0．83±0．12，显著高于常氧组的0．17±0．06（t=-16．96，P〈0．001）；缺氧＋PDTC组Fh中nf—κb蛋白表达量为0．31±0．08，显著低于缺氧组（t=12．73，P〈0．001）。（3）培养48h，缺氧组Fb中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．73±0．09、1．25±0．10、1．16±0．07，显著高于常氧组的0．14±0．06、0．87±0．08、0．77±0．13（t值为9．24—11．24，P值均小于0．001）；常氧＋PDTC组Fh中α—SMA蛋白表达量为0．24±0．07，显著高于常氧组（t=4．22，P〈0．01），Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．25±0．06、0．32±0．11，显著低于常氧组（t值分别为-4．31、-3．88，P值均小于0．01）；缺氧＋PDTC组F11中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．09±0．08、0．38±0．12、0．47±0．08，显著低于缺氧组（t值为11．78～22．98，P值均小于0．001）。结论缺氧能够显著上调人真皮Fb中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达，其可能促进了Fb向肌Fb的表型转化，且可能与nf—κb信号通路的激活有关。

摘要：背景:青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体,在治疗类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)方面,具有较明确的疗效,但其治疗机制尚不清楚。目的:观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvantarthri-tis,AA)大鼠滑膜细胞核因子-κb(nf-κb)活性及肿瘤坏死因子(Tnf-αmRNA、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响,以阐明该药治疗RA的可能机制。设计:以细胞为研究对象,分组对照的重复测量设计。单位:一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所。材料:实验于2002-03/2002-10在全军烧伤研究所实验室完成。实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只。以AA大鼠为模型,收集滑膜细胞,依次作如下分组:正常对照组,AA组,AA+青藤碱30mg/L组,AA+青藤碱60mg/L组,AA+青藤碱120mg/L组。电泳迁移率改变分析法测nf-κb的活性,反转录PCR检测Tnf-αmRNA,IL-1βmRNA,IL-10mRNA的表达。主要观察指标:不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞nf-κb活性,Tnf-1βmRNA,IL-1βmRNA及IL-10mRNA的对比结果。结果:与正常对照组相比,AA后滑膜细胞内nf-κb活性与Tnf-αmR-NA,IL-1βmRNA,IL-10mRNA的表达均显著升高,分别为17±6,0.570±0.047,0.730±0.093,0.683±0.081(t=2.71～4.07,P<0.05)。?

摘要：目的制备3－{ 4－[ 2－羟基－ （1－甲基乙胺基） 丙氧基]苯基}丙酸十六醇酯 （PAC） 修饰的纳米粒，观察其对心肌细胞的靶向性及对心肌的保护作用。方法（1）将HL－1心肌细胞按随机数字表法分成花青素Cy3标记的非靶向小干扰RNA（Cy3－siNC）组和针对nf－κb－p65基因设计的花青素Cy3标记的小干扰RNA（Cy3－si435）组，每组3孔。Cy3－siNC组细胞转染Cy3－siNC，Cy3－si435组细胞转染Cy3－si435。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞nf－κb－p65 mRNA的表达。（2）采用复乳溶剂挥发法制备PAC修饰且载有Cy3－siNC（Cy3－siNC－PAC）的纳米粒和PAC修饰且载有Cy3－si435（Cy3－si435－PAC）的纳米粒。扫描电镜观察Cy3－si435－PAC纳米粒的形态，纳米粒度及zeta电位仪检测Cy3－si435－PAC纳米粒的粒径和电势，紫外分光光度计测定Cy3－si435－PAC纳米粒的包封率、载药量，透析法测定Cy3－si435－PAC纳米粒的Cy3－si435释放量。（3）另取HL－1细胞，按随机数字表法分成4组，每组9孔。阴性对照组加入5 μL PbS；25、50、100 mg/mL Cy3－si435－PAC纳米粒组分别加入5 μL 25、50、100 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染6、12、24 h时，每组各取3孔，噻唑蓝法检测细胞的增殖活性。（4）另取HL－1细胞，培养24 h后加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染0、4、8、12、24 h时各取3孔细胞，流式细胞仪检测摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比。（5）另取HL－1细胞，按随机数字表法将细胞分成2组，每组3孔。Cy3－siNC－PAC组加入100 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－PAC组加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞nf－κb－p65 mRNA的表达。（6）取6只雄性C57bL/6J小鼠，按随机数字表法分为2组，每组3只。Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠尾静脉分别注射500 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒和Cy3－si435－PAC纳米粒（50 mg/mL），注射后24 h，再分别腹腔注射LPS（10 mg/kg），诱导心肌损伤。伤后24 h，小动物成像仪检测纳米粒在小鼠体内的分布情况。（7）另取9只雄性C57bL/6J小鼠，按随机数字表法分为3组，每组3只。Cy3－siNC－生理盐水（NS）组和Cy3－siNC－LPS组小鼠尾静脉注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－LPS组小鼠注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。注射后24 h，Cy3－siNC－NS组小鼠腹腔注射NS；Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS，诱导心肌损伤。伤后24 h，取各组小鼠心肌组织，HE染色观察心肌病理变化。对数据行t检验、单因素方差分析。结果（1）Cy3－si435组细胞nf－κb－p65 mRNA表达量为0.183±0.004，明显低于Cy3－siNC组的1.003±0.092（t＝15.46，P〈0.01）。（2）制备的Cy3－si435－PAC纳米粒形态良好，粒径大小为146.0 nm，电势为－29.2 mV，包封率为（86.9±1.1）%，载药量为（25.4±0.9）%，Cy3－si435释放稳定。（3）转染6、12、24 h，4组细胞增殖活性总体比较，差异均无统计学意义（F值为0.129～2.512，P值均大于0.05）。（4）转染0、4、8、12、24 h时，摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比分别为（0.79±0.06）%、（31.04±1.59）%、（51.64±2.67）%、（68.15±2.60）%、（83.68±4.67）%。（5）Cy3－si435－PAC组细胞nf－κb－p65 mRNA的表达量为0.286±0.015，明显低于Cy3－siNC－PAC组细胞的1.002±0.073（t＝16.62，P〈0.01）。（6）伤后24 h，Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠心肌细胞都能够观察到分布均匀的纳米粒。（7）Cy3－siNC－NS组小鼠心肌纤维结构致密，无炎性细胞浸润，胞质分布均匀；Cy3－siNC－LPS组小鼠心肌纤维结构疏松，炎性细胞浸润，胞质分布散乱；Cy3－si435－LPS组小鼠心肌纤维结构较致密，未见明显炎

摘要：背景:严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质。烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚。目的:观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性nf-κb抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内nf-κb活性、Iκb-α的表达及肿瘤坏死因子(Tnf-α)的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。设计:随机对照的实验研究。单位:创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料:实验于1999-01/06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成。实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只。干预:以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤。实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48h组。收集腹腔巨噬细胞。采用放射免疫法检测Tnf-α的含量,电泳迁移率改变分析法测nf-κb的活性,免疫印迹法测Iκb-α的表达,反转录-PCR测Tnf-αmRNA的表达。主要观察指标:①检测Tnf-α的含量。②测定nf-κb的活性。③检测Iκb-α的表达。④测Tnf-αmRNA的表达。结果:烫伤后巨噬细胞分泌Tnf-α亢进,于伤后12h达到高峰,为(1085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P<0.01)。nf-κb活性于伤后明?

摘要：目的　探讨核因子 (nf) -κb圈套寡核苷酸 (ODN)对nf -κb活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。　方法　利用电泳迁移率改变实验 (EMSA) ,测定合成的环状哑铃形圈套ODN对nf -κb的DNA结合能力的竞争抑制作用 ;利用nf -κb反应性报告细胞株HEK -不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP) ,观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠 96只 ,随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织nf -κb的DNA结合活性 ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测大鼠肝脏组织Tnf -α、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )mRNA水平 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子 -α(Tnf -α)、IL - 6的蛋白水平。　结果　设计的环状哑铃形圈套ODN对nf -κb的DNA结合能力具有竞争抑制作用 ,1 μg ml和 2 μg ml圈套ODN瞬时转染HEK -d2EGFP ,可明显抑制p6 5蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后 3h ,肝脏nf -κb活性开始升高 ,伤后 1 2h达高峰。肝脏组织Tnf -α、IL - 6mRNA水平和蛋白水平也明显上升 ,与nf -κb的活性改变一致。圈套ODN治疗后 ,大鼠肝脏组织Tnf -α、IL - 6的表达明显下降 ,肝脏功能明显好转 ,而无关ODN则没有治疗效果。　结论　设计的靶向nf

摘要：背景:利多卡因被认为有抗炎作用,而其作用机制不清。核转录因子κb是炎症反应的关键环节。目的:观察利多卡因对人体中性粒细胞核转录因子κb激活和中性粒细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:对比观察,于2006-10/2007-02在江苏省麻醉学重点实验室完成。材料:肿瘤坏死因子α(O127:b8)购于Sigma公司;外周血标本健康者,受试者知情同意。方法:人体中性粒细胞分为5组:生理盐水对照组、肿瘤坏死因子α组、肿瘤坏死因子α+利多卡因1.0mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因2.0mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因4.0mmol/L组,共同孵育3h。主要观察指标:以反转录聚合酶链反应及免疫印迹法检测利多卡因对核转录因子κbmRNA和I-κbmRNA表达及蛋白含量的影响。孵育12h和24h,以流式细胞术分析对中性粒细胞凋亡的影响。结果:利多卡因组核转录因子κbmRNA表达显著降低,而I-κbmRNA表达显著增加。并且利多卡因2.0mmol/L组和4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组(P0.05)。利多卡因在12h和24h都可以显著抑制肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞凋亡(P<0.05),而4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组(P<0.05)。结论:利多卡因1.0,2.0,4.0mmol/L都可以显著下调肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞P65mRNA的表达,并且在12和24h可以部分逆转肿瘤坏死因子α诱导的中性粒细胞凋亡。

摘要：目的设计合成靶向nf-κb的哑铃形“圈套”ODNs,并检测其对nf-κb转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子(Tnf-α和IL-6)表达的抑制效应。方法采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对nf-κb转录活性的抑制效应。提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组。采用阳离子脂质体将2、4和8mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6h后用LPS刺激,收集转染后8、12和18上清和细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清细胞因子蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测细胞因子mRNA转录。结果哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制nf-κb与其顺式元件的结合;4、8mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞Tnf-α和IL-6转录与表达。结论靶向nf-κb的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制nf-κb的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应。

摘要：背景:视网膜色素变性是非炎症性、双侧进行性的视网膜变性,其特征是光感受器细胞因发生凋亡而丢失,最终导致失明。中药黄芪在阻止该病的进程上显示出了良好的前景。目的:观察黄芪对N-甲基-N-亚硝脲致SD大鼠视网膜损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:新乡医学院药学院。材料:实验于2004-03/12在中山大学中山眼科中心药理实验室完成。雌性SD大鼠114只,由中山大学中山医学院动物中心提供,N-甲基-N-亚硝脲为美国Sigma公司产品,黄芪注射液为成都地奥九泓制药厂生产(生产批号:国药准字Z99060535,2mL/支,主要成分为黄芪)。方法:选用雌性SD大鼠114只,30只用于视网膜层形态学分析;30只用于细胞凋亡检测;54只用于胞核内核因子κbp65活性的检测。采用抽签法随机分组,每组6只。于大鼠生后47d,分别经腹腔注射不同剂量的黄芪(2.5,5和10g/kg),1次/d,除对照组外,其余组的大鼠同时于生后50d腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲60mg/kg。在N-甲基-N-亚硝脲处理不同时间后处死动物,取眼球,视网膜形态学分析测量周边视网膜的总厚度,TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡,转录因子试剂盒分析核因子κbp65的活性。主要观察指标:各组视网膜厚度、凋亡指数和胞核内核因子κbp65的活性比较。结果:黄芪可剂量依赖性地显著增加周边视网膜总厚度和降低N-甲基-N-亚硝脲引起的光感受器细胞凋亡指数。黄芪注射液10g/kg还可时间依赖性地上调视网膜细胞胞核内核因子κbp65的活性。但其对N-甲基-N-亚硝脲引起的中心视网膜损伤无明显的保护作用。结论:黄芪通过上调视网膜细胞胞核内核因子κbp65的活性,抑制光感受器细胞凋亡,从而部分地保护N-甲基-N-亚硝脲引起的视网膜损伤。

摘要：目的　建立实验犬心肌组织细胞核转录因子 (nf -κb)快速提取及鉴定方法。方法　采用液氮快速冷冻使犬心肌组织破碎 ,并优化核蛋白提取鉴定条件 ,参考哺乳动物鼠Igκ轻链基因 ,设计可与犬心肌细胞核转录因子结合的序列 ,在不同的提取和标记条件下 ,通过凝胶阻滞分析nf -κb活性。结果　两种提取及标记条件 ,凝胶阻滞分析结果有明显不同。按优化实验的方法提取和标记nf -κb ,实验结果更为理想。结论　优化提取条件后 ,提取犬心肌细胞nf -κb的方法简便、快速 ;设计的特异DNA探针可与犬心肌组织细胞nf -κb特异结合并显示良好的结合活性 ,为实验犬在急性事件时其心肌组织细胞nf -κb活性的研究提供了可行方法。