摘要：核因子κb(nf-κb)普遍存在于真核生物的细胞中,是重要的诱导性转录因子,在细胞的生长、增殖、分化、凋亡,以及癌变过程中均发挥重要作用。当细胞受到各种内外界的刺激,nf-κb信号通路被激活,核因子与相应基因结合从而调节靶基因的表达。研究发现nf-κb信号通路激活主要有经典途径和旁路途径两种。同时还发现,nf-κb信号通路的激活和抑制会相应的调节细胞各种生理生化反应。在机体中,nf-κb信号通路的激活往往伴有肿瘤或炎症的发生。文章主要综述了nf-κb信号通路相关蛋白的结构和功能,以及nf-κb信号通路的激活和抑制在治疗肿瘤和炎症等疾病方面的的最新研究进展。对nf-κb信号通路相关靶点的研究,为新的消炎和抗肿瘤药设计以及疾病的治疗等提供有益的思路。

摘要：为探究羊口疮病毒(ORFV)129蛋白对nf-κb信号通路介导的宿主细胞因子转录水平的影响,本研究首先设计并合成山羊4种细胞因子基因特异性引物,分别以构建的4种细胞因子重组质粒为模板,经条件优化建立了检测山羊4种细胞因子的SYbR Green I荧光定量RT-PCR方法。结果显示,所建立的4种细胞因子SYbR Green I荧光定量RT-PCR方法熔解曲线呈单一峰,无引物二聚体;4种细胞因子重组质粒标准品最低检测限分别为IL-6:1.40×10^(2)拷贝/μL、IL-1β:1.92×10^(2)拷贝/μL、IFN-γ:1.69×10^(2)拷贝/μL、Tnf-α:2.31×10^(1)拷贝/μL;组内及组间变异系数在0.1%~2.3%。表明所建立的山羊4种细胞因子荧光定量RT-PCR特异性强,灵敏度高,稳定性好,可用于4种细胞因子mRNA转录水平的检测。随后本研究将包含编码ORFV 129完整蛋白基因的重组质粒pEGFP-ORFV 129和pEGFP-N1空质粒分别转染山羊睾丸支持细胞(GTSCs)24 h后,用终浓度20 ng/mL的Tnf-α刺激转染细胞6 h后收集细胞,利用建立的荧光定量RT-PCR方法检测GTSCs中IL-1β、IL-6、IFN-γ和Tnf-α共4种细胞因子mRNA的转录水平,结果显示,与转染pEGFP-N1空载的细胞相比,转染了pEGFP-ORFV 129重组质粒的细胞IL-1β、IL-6和IFN-γmRNA的转录水平均极显著下降(p0.1),表明ORFV 129蛋白能够抑制GTSCs中nf-κb信号通路介导的IL-1β、IL-6、IFN-γ和Tnf-αmRNA的转录水平。本研究通过建立山羊IL-1β、IL-6、IFN-γ和Tnf-α4种细胞因子的SYbR Green I荧光定量PCR方法,首次检测证实了ORFV 129蛋白不同程度地抑制GTSCs中nf-κb信号通路介导的IL-1β、IL-6、IFN-γ和Tnf-αmRNA的转录水平,为ORFV129蛋白功能研究奠定了基础。

摘要：核因子-κb(nuclear factor-kappa b,nf-κb)信号通路与抑郁症的发生发展密切相关,在抑郁症所致炎症、应激反应、细胞分化和增殖及细胞凋亡过程中发挥着重要作用。中医药能够通过调控nf-κb信号通路有效治疗抑郁症,包括常见的黄酮类、酚类及三萜类等化合物单体,经典的中医方剂及针灸、功法、耳穴等其他中医疗法。现有研究存在一定的局限性,如nf-κb信号通路与其他信号通路之间的相关性尚未明确,今后可进一步设计多角度的实验研究,丰富实验结果;中药复方作用于nf-κb信号通路的具体成分并不确定,可通过生物信息学、代谢组学和高通量质谱等新型生物技术进行深入的探究,为抑郁症的防治提供新思路和新方向。

摘要：细胞生物学实验是细胞生物学课程教学的重要组成部分,对于帮助学生更好掌握相关理论知识,培养学生的实验操作能力、科研思维能力均具有重要作用。细胞信号转导是细胞生物学理论课内容的重要章节,目前在高校本科生细胞生物学实验教学中,鲜有关于细胞内信号通路转导检测和观察的实验。该团队根据自身的科研活动和教学经验累积设计了一个独立完整的综合性实验,包含4个相互联系的实验,意在探究小鼠腹腔巨噬细胞中nf-κb信号通路的活化情况,实验分别为:(1)小鼠腹腔巨噬细胞的提取及纯化;(2)炎性因子刺激下,RelA/p65在细胞内定位的观察;(3)小鼠腹腔巨噬细胞中炎症因子mRNA表达变化的检测;(4)小鼠腹腔巨噬细胞中炎症因子蛋白表达变化的检测。该综合性实验容易获得较纯的原代小鼠腹腔巨噬细胞,并且在提取的细胞中能够明显检测到细胞内信号通路的转导情况,实验结果易于观察。这样一个独立完整的综合性实验,不仅能够丰富和优化本科生细胞生物学实验教学的内容和模式,并且能够使学生从实验中真正深入地了解机体内炎症反应过程中信号通路的转导等相关知识,加深学生对于理论课程的理解。

摘要：目的观察玉屏风散加味含药血清对大鼠肺上皮Ⅱ型细胞RLE-6TN炎症反应的影响,基于核因子(nf)-κb信号通路探讨其作用机制。方法采用脂多糖诱导RLE-6TN细胞炎症反应,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松血清组和5%、10%、20%中药血清组,分别以不同血清干预细胞24 h。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,荧光染色检测细胞活性氧(ROS)含量,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(Tnf-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量,RT-qPCR检测细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、nf-κb抑制蛋白α(Iκbα)mRNA表达,Western blot检测细胞TLR4、MyD88、nf-κbp65、Iκbα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组RLE-6TN细胞上清液LDH、Tnf-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),IκbαmRNA表达显著降低(P<0.01),p-nf-κbp65/nf-κbp65、p-Iκbα/Iκbα比值显著升高(P<0.01);与模型组比较,20%中药血清组和地塞米松血清组细胞RLE-6TN细胞上清液LDH、Tnf-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),IκbαmRNA表达显著升高(P<0.01),p-nf-κbp65/nf-κbp65、p-Iκbα/Iκbα比值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论玉屏风散加味含药血清可减轻RLE-6TN细胞炎症反应,其机制可能与调控nf-κb信号通路有关。

摘要：目的:探讨高迁移率族蛋白b1(HMGb1)对血管瘤内皮细胞(HemECs)活力和凋亡的影响及机制。方法:分离培养人HemECs,将设计并合成的HMGb1小干扰RNA(HMGb1-siRNA)转染HemECs。CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blot检测HMGb1、nf-κb p65、p-Iκbα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和survivin的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,转染HMGb1-siRNA的HemECs中HMGb1的蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC组比较,转染HMGb1-siRNA的HemECs活力显著降低,凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,nf-κb p65、p-Iκbα、cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低(P<0.05);且与si-HMGb1组比较,HemECs中加入nf-κb信号通路抑制剂PDTC后,细胞活力抑制、凋亡率和ROS诱导及nf-κb p65、p-Iκbα、cyclin D1和survivin的蛋白表达下调更明显(P<0.05)。结论:抑制HMGb1表达可降低人HemECs活力和诱导凋亡,机制可能是通过提高ROS含量及下调nf-κb信号通路。

摘要：本研究通过脂多糖(LPS)诱导建立了Caco-2细胞体外肠炎模型,探究不同聚合度(DPs)灵芝β-葡寡糖的抗炎活性和作用机制。比较白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tnf-α)以及活性氧(ROS)的水平可知,不同聚合度灵芝β-葡寡糖组分均能抑制LPS诱导的Caco-2细胞中IL-1β、Tnf-α及ROS的释放;进一步通过蛋白免疫印迹法(Western blot)对其抗炎机制进行探究,发现灵芝β-葡寡糖能显著降低LPS诱导的Caco-2细胞nf-κb p65蛋白的水平。说明灵芝β-葡寡糖能通过调节nf-κb p65蛋白的表达下调炎症因子水平、减少细胞内氧化应激,从而在肠细胞中产生抗炎作用,其中聚合度为8-24的F3组分作用效果最佳。本研究可为灵芝β-葡寡糖在抗炎功能活性中的应用提供理论基础。

摘要：目的:探讨RNA干扰转录激活因子5(ATF5)基因表达对脑胶质瘤细胞活力、凋亡率及nf-κb信号通路的影响。方法:将设计合成的ATF5特异性siRNA(siATF5组)和阴性对照siRNA(NC组)分别转染人脑胶质瘤U251细胞,采用nf-κb信号通路抑制剂PDTC处理细胞,MTT法、流式细胞术及Western blot法分别检测细胞活力、凋亡率及ATF5、血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶2(COX-2)、 p-p65、p-Iκb和bax的蛋白水平。结果:转染siATF5的U251细胞中ATF5的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,siATF5组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,VEGF、COX-2、 p-p65和p-Iκb的蛋白水平明显降低,bax的蛋白水平明显升高(P<0.05)。与siATF5组相比,siATF5和PDTC同时处理的U251细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:下调ATF5基因表达可降低脑胶质瘤细胞的活力,诱导细胞凋亡,降低免疫抑制因子VEGF和COX-2表达,其机制可能与下调nf-κb信号通路有关。

摘要：目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)小干扰RNA(siRNA)是否通过nf-κb信号途径下调bcl-2而抑制宫颈癌细胞的增殖。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条特异性siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞。通过半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后He La细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平,Western印迹法检测p65及bcl-2蛋白表达水平,MTT法和平板克隆检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:3条针对TLR4基因的siRNA均能抑制TLR4的mRNA和蛋白表达,其中TLR4-siRNA-003的沉默效率最高。转染TLR4-siRNA-003 48 h后细胞中TLR4的mRNA和蛋白表达水平分别下调62%和89%,p65及bcl-2蛋白水平明显下调,同时细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞于G1期。结论:TLR4特异性siRNA能够有效沉默TLR4基因表达,并通过nf-κb信号通路下调bcl-2而显著抑制宫颈癌He La细胞的增殖。TLR4可能成为治疗宫颈癌的一个新靶点。

摘要：以RAW 264.7细胞为研究对象,探究苦豆子对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用和机制。采用水煎煮、水超声、75%乙醇回流和75%乙醇超声分别制备苦豆子水煎煮提取物(water decocting extract,WDE)、水超声提取物(water ultrasonic extract,WUE),75%乙醇回流提取物(ethanol reflux extract,ERE)和75%乙醇超声提取物(ethanol ultrasonic extract,EUE),D101大孔树脂吸附法制备苦豆子总生物碱提取物(total alkaloids extract,TAE)和总黄酮提取物(total flavonoids extract,TFE),水提醇沉法制备苦豆子总多糖提取物(total polysaccharides extract,TPE),通过酸性染料比色法、NaNO 2-Al(NO 3)3-NaOH分光光度法、苯酚-硫酸法分别测定TA、TF和TP的含量,并采用正交法初步设计TAE、TFE和TPE 9种配伍组合(1∶1∶1、1∶2∶2、1∶3∶3、2∶1∶2、2∶2∶3、2∶3∶1、3∶1∶3、3∶2∶1、3∶3∶2),脂多糖(1μg/mL)诱导R AW 264.7细胞建立体外细胞炎症模型,利用细胞增殖检测试剂盒检测细胞活力,硝酸还原酶法检测一氧化氮的释放,酶联免疫吸附法检测细胞白介素-1β、白介素-6、肿瘤坏死因子-α的分泌,蛋白免疫印迹技术检测细胞p65 nf-κb、p-p65 nf-κb、Iκbα、p-Iκbα蛋白的表达。结果显示,TAE、TFE、TPE中TA、TF、TP的含量分别为94.79%、71.59%和73.51%。与模型组相比,WDE、WUE、E R E、EUE、TAE、TFE、TPE及其9种配伍组合显著降低了IL-1β、IL-6、Tnf-α以及NO的释放,以TAE∶TFE∶TPE为2∶1∶2抑制效果最好,其极显著降低了Iкbα和p65 nf-κb的磷酸化水平(P<0.01)。综上所述,苦豆子对脂多糖诱导的R AW 264.7细胞炎症具有一定的抗炎作用,以TAE∶TFE∶TPE为2∶1∶2抗炎效果最佳,其通过抑制nf-κb信号通路的激活及下游炎症介质的转录表达,缓解LPS诱导的R AW 264.7细胞的炎症反应。