摘要：目的：构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的nk4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GenBank中的HTERT启动子（HTERTp）序列设计引物，以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板，PCR扩增HTERTp，并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中，构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp；nk4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中，构建成pSG—HTERTp／pA—nk4穿梭质粒，脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测nk4基因的转录；Western Blot检测nk4蛋白的表达。结果：成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的nk4基因重组腺病毒，滴度为4．5×10^9空斑形成单位（pfu）／mL，且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论：成功构建出HTERT启动子调控的nk4基因重组腺病毒，为进一步研究nk4基因的作用机制打下实验基础。

摘要：目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和nk4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-nk4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及nk4 mRNA序列,设计扩增IL-2及nk4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hnk4质粒为模板,分别扩增IL-2及nk4基因,并将IL-2及nk4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和nk4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-nk4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和nk4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-nk4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-nk4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-nk4质粒细胞的IL-2及nk4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及nk4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、nk4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-nk4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和nk4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-nk4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.