摘要：根据NCBI nlrp3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-nlrp3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了nlrp3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中nlrp3表达水平。最佳引物浓度为0.15μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%~0.184%,批间变异系数为0.221%~0.594%,重复性好。该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的nlrp3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),nlrp3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mRNA拷贝数达18000左右,可持续42 d。表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体nlrp3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持。

摘要：目的探究外周血A20基因、nlrp3基因评价生物制剂治疗幼年特发性关节炎疗效的临床价值。方法选择2019年3月-2020年6月华中科技大学协和深圳医院收治的30例幼年特发性关节炎患儿设为病例组,另选同期儿童保健门诊30例无任何疾病的健康儿童设为健康组,比较两组外周血A20基因、nlrp3基因表达水平。同时对病例组患儿予以生物制剂治疗,比较治疗前后患者JADAS27评分、外周血A20基因、nlrp3基因表达水平的差异。并根据治疗效果将病例组患儿分为治疗有效亚组与治疗无效亚组,比较两亚组外周血A20基因、nlrp3基因表达水平。结果病例组患儿治疗前的外周血A20基因表达水平显著低于健康组,nlrp3基因表达高于健康组(P<0.05)。病例组患儿治疗后的外周血A20、nlrp3基因、JADAS27评分与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效亚组的外周血A20高于治疗无效亚组,nlrp3基因低于治疗无效亚组(P<0.05)。经Pearson相关系数分析,JADAS27评分与外周血A20表达呈负相关,与nlrp3基因呈正相关(P<0.05)。结论应用生物制剂治疗幼年特发性关节炎后,进行外周血A20基因、nlrp3基因检测有助于监测幼年特发性关节炎病情活动及疗效。

摘要：nlrp3基因是能够识别PAMPs和胞内危险信号的1种重要的炎性小体,参与机体对体内外病原微生物的防御和维持自身稳态。首次发现翘嘴鳜存在1个雄性特异的nlrp3基因。通过设计基因特异扩增引物,并在22条雌鱼和22条雄鱼中进行PCR扩增,证实了该基因只在翘嘴鳜雄鱼中存在。为了解该nlrp3基因的潜在功能,成功克隆得到该基因的全长蛋白编码序列,并通过序列比对和系统发育分析,初步证明该基因具有NACHT、LRR和PYD等多个关键结构域,在鲈形目鱼类中具有较高的保守性。另外,通过荧光定量分析的方法研究了nlrp3基因在雄性翘嘴鳜不同组织以及在不同时期性腺中的表达差异,发现翘嘴鳜nlrp3基因在肝脏、胃和肠等组织有较高的表达,且在翘嘴鳜雄性性别分化早期有显著高表达,在性别分化后几乎不表达。

摘要：目的构建针对小鼠nlrp3基因的腺病毒干扰载体(Ad-nlrp3-shRNA),并在Min6和RAW264.7细胞中验证其基因沉默效率。方法针对小鼠nlrp3基因设计、合成3对nlrp3shRNA1-3干扰序列,重组至pHBAd-U6-CMV质粒载体。在HEK293T细胞内包装Ad-nlrp3-shRNA。感染Min6和RAW264.7细胞后,采用实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测nlrp3基因表达。结果Ad-nlrp3-shRNA1-3在Min6和RAW264.7细胞的干扰效率分别达到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。结论成功构建出Ad-nlrp3-shRNA载体,为研究nlrp3基因的功能提供有效工具。

摘要：【目的】采用孟德尔随机化法(MR)推断炎症小体nlrp3水平与冠心病发生风险之间的关联。【方法】依托东南大学中大医院心血管内科,对经冠状动脉造影确诊的321个冠心病病例和293个正常对照的人群,进行流行病学调查与血样标本采集。采用ELISA方法测定血清nlrp3水平;采用RFLP-PCR的基因分型方法,检测研究对象的nlrp3基因rs10754558(C/G)的多态性;以nlrp3基因rs10754558(C/G)作为工具变量,结合血清学相关表型nlrp3水平,采用线性回归分析和Logistic回归分析的方法分别构建基因型-表型、基因型-疾病结局之间的关联,进而使用MR方法推断相关细胞因子(表型)与CAD发生之间的因果关联。【结果】nlrp3基因变异rs10754558(C/G)与冠心病风险间以及nlrp3水平之间的关联均具有统计学意义,回归系数β_(ZY)=0.45,β_(ZX)=2.34,进而通过孟德尔随机化法推断出的nlrp3水平与冠心病风险的关联回归系数β_(XY)=β_(ZY)/β_(ZX)=0.45/2.34=0.19,表明nlrp3水平每增加1 ng/mL水平,冠心病的风险增加20.9%(OR=e^(0.19)=1.209)。通过传统病例对照研究设计直接获得的nlrp3水平与冠心病风险的关联回归系数β_(XY)=0.03,表明nlrp3每升高1 ng/mL,个体发生CAD的风险增加了3.1%(OR=e^(0.03)=1.031,95%CI=1.003-1.058),相比MR方法推断的关联强度较小。【结论】通过孟德尔随机化法验证了炎症小体nlrp3水平与冠心病风险之间的关联,比传统关联研究更接近真实因果关联。