摘要：目的研究华蟾素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用及其机制。方法用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)结肠灌注建立UC大鼠模型。按照大鼠体重随机分为对照组、模型组、阳性对照组、华蟾素低剂量组(HCS-L)、华蟾素高剂量组(HCS-H),每组6只。对照组、模型组予以生理盐水灌肠,阳性对照组给予美沙拉嗪灌肠液1.5 g3;kg^(-1)灌肠,HCS-L、HCS-H分别予以华蟾素200、400 mg3;kg^(-1)灌肠,每日1次,连续14 d。用疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)进行评分,用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病理变化,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中炎性因子水平,用免疫组化法检测结肠组织中nod样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、咬合蛋白(Occludin)、带状闭合蛋白(ZO-1)的表达情况。结果对照组、模型组、阳性对照组、HCS-L、HCS-H的DAI评分分别为0.11±0.27,2.44±0.54,1.22±0.78,1.33±0.73,1.06±0.61;上述5组的CMDI评分分别为0.17±0.41,2.83±1.17,1.00±0.89,1.33±0.52,0.83±0.75;与正常组比较,模型组DAI评分、CMDI评分均显著升高,与模型组比较,阳性对照组、HCS-L、HCS-H的DAI评分、CMDI评分均显著降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均显著升高,与模型组比较,阳性对照组、HCS-L、HCS-H血清中IL-1β、IL-18、TNF-α均显著降低(均P<0.01);与正常组比较,模型组结肠组织中NLRP3、caspase-1的平均光密度值均显著升高,Occludin、ZO-1的平均光密度值均显著降低(均P<0.01),与模型组比较,阳性对照组、HCS-L、HCS-H结肠组织中NLRP3、casepase-1的平均光密度值均显著降低,Occludin、ZO-1的平均光密度值均显著升高(均P<0.01)。结论华蟾素可明显缓解UC大鼠症状,改善UC大鼠肠黏膜病变,其机制可能与抑制NLRP3的过度激活、降低炎症反应、增强黏膜屏障的完整性有关。

摘要：目的建立以Taq Man探针实时荧光PCR技术为基础的核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain,Leucine rich Repeat and Pyrin domain containing,NLRP3)基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法以20份健康人血液样本为对象,选择NLRP3基因的两个SNP位点(rs3806265和rs35829419),针对每个位点分别设计1对PCR引物和2条Taq Man探针,进行实时荧光PCR扩增,对SNP位点进行分型。用常规PCR和基因测序的方法对Taq Man探针实时荧光PCR分型的结果进行验证。结果用建立的Taq Man探针实时荧光PCR分型法对20份样本进行检测,其中rs3806265位点发现TT基因型3份,TC基因型8份,CC基因型9份;rs35829419位点发现CC基因型20份,无AC和AA基因型。分型结果与常规PCR及基因测序分型方法完全一致。结论基于Taq Man探针技术的实时荧光PCR方法简单、快速,可实现对NLRP3基因位点的分型检测。