摘要：目的构建Neuropilins-2(nrp2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法以nrp2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的nrp2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。重组pGenSil-nrp2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其nrp2蛋白表达。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功。重组体pGenSil-nrp2转染LOVO细胞48 h后nrp2蛋白表达显著降低。结论利用RNAi技术可成功构建抑制nrp2表达的小干扰RNA重组体。

摘要：目的:构建VEGF-C基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法:以VEGF-C为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的VEGF-C基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pGenSil-VEGF-C质粒转染LOVO细胞48小时,检测其对LOVO细胞VEGF-C蛋白与mRNA表达的影响。结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低Lovo细胞VEGF-C的蛋白和mRNA表达,重组载体构建成功。结论:利用RNAi技术可成功构建抑制VEGF-C表达的小干扰RNA重组体。