摘要：目的:构建肿瘤-睾丸抗原ny.eso-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白ny.eso-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对ny.eso-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增ny.eso-1基因片段,经上下游引物所引入的EcoR I和Xho I双酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX-4T1-ny.eso-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达ny.eso-1/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定。结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达ny.eso-1/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44 000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90%,Western blot结果证实该ny.eso-1/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,提示为融合蛋白。结论:成功构建了ny.eso-1基因原核表达载体pGEX-4T1-ny.eso-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式ny.eso-1/GST融合蛋白。