摘要：为建立一种特异、灵敏、快速检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的分子检测方法,本研究利用金纳米颗粒材料与传统pcr技术相结合,针对BVDV 5′UTR保守序列设计引物,建立了BVDV nano-pcr新型分子检测方法,并与RT-pcr及商品化IDEXX试剂盒BVDV抗原检测方法分别对临床样品进行对比研究。特异性与敏感性试验结果显示,建立的nano-pcr只对BVDV特异,而对牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛副流感3型病毒（BPIV3）均无交叉反应;nano-pcr敏感性是普通pcr的10倍,最低核酸检测量为6.84×10~2copies/L。临床检测结果显示,建立的nano-pcr方法对38份临床样品的阳性检出率为34.21%,是RT-pcr的2.6倍,是IDEXX试剂盒的1.5倍。本研究结果表明,建立的BVDV nano-pcr方法可以用来对临床样品进行快速诊断和鉴定,具有特异性高、灵敏度好、快速稳定的优点。

摘要：为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通pcr方法优化,建立了三重nano-pcr检测方法。结果显示,三重nano-pcr检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒(1μL)最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规pcr的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的nano-pcr的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通pcr的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重nano-pcr方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重nano-pcr检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。

摘要：为建立一种灵敏且快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的分子检测方法,本研究采用纳米颗粒与普通pcr技术相结合,通过使用Oligo 7设计FPV的特异性引物,建立FPV nano-pcr分子检测方法,并与普通pcr方法进行对比分析。结果显示,所建立的nano-pcr的敏感度是普通pcr的10倍(10 fg/μL);特异性试验表明,nano-pcr只检测猫泛白细胞减少症病毒时呈阳性反应,而检测猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒(FHV)以及F81细胞cDNA/DNA时呈阴性反应。利用两种方法对采集的26份临床病料进行平行检测,发现nano-pcr与普通pcr阳性率分别为53.84%和42.31%。上述结果表明,所建方法具有敏感性好、特异强、简捷快速等优点,可应用于临床样品的快速检测和鉴定,为猫泛白细胞减少症的早期诊断和防控提供了一定技术保障。

摘要：为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结果表明,本试验建立的nano-pcr方法对BCoV特异,与牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)均无交叉反应。nano-pcr的敏感性是普通pcr的100倍,普通pcr最低核酸检测量为2.24×10^(3)copies/μL,nano-pcr最低核酸检测量为2.24×10^(1)copies/μL。应用所建立的方法对采集的43份腹泻牛的粪拭子、鼻拭子、肺部组织样品进行检测,检出BCoV阳性样品17份,普通pcr检出阳性样品11份,两种方法的符合率为100%。此次建立的nano-pcr在检测牛冠状病毒时具有更高的特异性和敏感性,对临床上的快速诊断及检测具有一定的意义。

摘要：为了给临床检测猪库布病毒(PKV)提供更加准确便捷的检测方法,本试验设计了1对特异性引物,扩增PKV基因组的VP0区域。在传统pcr反应体系中添加纳米金颗粒材料,优化后建立了一种方便快捷且特异检测PKV的nano-pcr方法。结果显示,该方法能特异性扩增猪库布病毒,与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪轮状病毒、猪札幌病毒均无交叉反应。nano-pcr相对于普通pcr表现出更高的敏感性,普通pcr的最低核酸检测浓度为5.61×10^(-7)ng/μL,而nano-pcr的最低核酸检测浓度为5.61×10^(-10)ng/μL,敏感性提高了1000倍。对来自不同发病猪场30份腹泻猪的粪便和血液临床样本的检测结果显示,nano-pcr阳性检出率为23.33%(7/30),普通pcr阳性检出率为16.66%(5/30)。结果表明,本试验建立的nano-pcr方法在猪库布病毒的检测中表现出更高的特异性和敏感性,对猪库布病毒的快速诊断和检测具有重要的临床意义。