摘要：目的构建新孢子虫ncsag4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法根据新孢子虫ncsag4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T连接,构建克隆载体pMD-ncsag4,经双酶切后回收目的片段,与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-ncsag4,用IPTG诱导,通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果成功构建了新孢子虫ncsag4基因原核表达载体pGEX-Nc-SAG4;SDS-PAGE电泳显示,在IPTG诱导下阳性菌高效表达了分子质量单位为18.79ku的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗新孢子虫的多克隆血清识别。结论成功构建了ncsag4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为建立经济、实用的诊断新孢子虫病的ELISA方法奠定了基础。