摘要：根据基因库中已发表的安祖花细菌性疫病致病菌粉黛黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris ***)基因序列设计引物XcF1/XcR1、XcF2/XcR2,通过扩增条件优化,建立了安祖花细菌性疫病的nested-pcr检测方法,可以直接从感染细菌性疫病的安祖花组织DNA中扩增出1条343bp的特异性条带。分析表明该序列完全存在于GenBank登录的Xanthomonas campestris ***序列X70380.1中。通过对安祖花植株进行nested-pcr扩增,在植株不同部位均检测到了343bp的特异性条带,且病原菌在植株中分布不均匀,其中老叶叶柄中扩增强度最高,根茎连接处、老叶、嫩叶柄、嫩叶、佛焰苞柄扩增强度次之,根、佛焰苞和花序中扩增最弱。

摘要：目的:研究西安市乙肝患者HBV基因型分布状况,初步建立适用于临床的HBV基因分型的方法。方法:对收集的360例乙肝患者血清样本,针对乙肝病毒基因型(A-H)前S1到S基因的保守序列设计出12条内外引物,采用nested-pcr进行2轮扩增,第2轮产物使用30 g/L琼脂糖进行电泳,根据片断大小进行基因分型。结果:分型成功348例,其中HBV B基因型87例(24.2%);C型233例(64.7%);B+C混合型2例(0.56%),未检出A、D、E、F、G、H型。结论:nested-pcr适用于临床HBV基因分型常规检测,通过该方法的检测表明西安市HBV感染者以C基因型为主,B型次之,其余基因型分布较少。

摘要：根据猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)和猪呼吸道冠状病毒 (PRCV)的基因组核苷酸序列 ,在S基因 (纤突蛋白基因 ) 5′端保守区设计了一对引物P3 /P4,该对引物在TGEV扩增跨幅约为 2 .4kb ;而PRCV由于在此区域存在一约 0 .6kb碱基缺失 ,扩增跨幅约为 1.8kb。用引物P3 /P4对TGEVMiller株、Purdue株和PRCVAR310株分别进行RT_pcr ,根据RT_pcr扩增片段大小可以直接区分TGEV和PRCV。用引物P3 /P4与引物P1/P2 作nested_pcr ,提高了该RT_pcr的特异性和敏感性 。

摘要：根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的nested-pcr检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的nested-pcr能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的nested-pcr具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。

摘要：目的建立了一种特异、敏感、快速的玉米内州萎蔫病菌的巢式pcr(Nest-pcr)检测方法。方法根据玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis ***,Cmn)和***种下其他4个亚种细菌Cmm、Cmi、Cms、Cmt的ITS序列差异性基因位点设计Cmn FP-OUTER/Cmn RP-OUTER为外侧引物,Cmn FP-INNER/Cmn RP-INNER为内侧引物的巢式-pcr,并对所有参试菌株DNA和菌悬液进行了扩增。结果经过两轮扩增,能从参试的玉米内州萎蔫病菌中特异性地扩增出1条122 bp的片段,而其他参试菌株没有扩增信号。该巢式pcr检测方法对菌悬液的最低检测限为3.54×102 CFU/m L,检测灵敏度比常规pcr提高了1000倍。结论本研究建立的玉米内州萎蔫病菌的巢式pcr(nest-pcr)检测方法具有良好的特异性和灵敏性,将会在玉米内州萎蔫病的早期诊断及预防传入方面发挥重要作用。