摘要：目的分析沈阳和甘肃发病猪场的2株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因和nsp2基因变异情况。方法采用RT-PCR方法,对ORF5基因序列和nsp2基因部分序列进行扩增、克隆并测序。并用DNAStar软件将测序结果与国内外发表的10株参考毒株进行比对分析。结果 2株分离株ORF5基因与国内外其它美洲型分离株核苷酸的同源性为88.6%～98.7%,推导的氨基酸的同源性为86.6%～98.0%;nsp2基因的核苷酸同源性为73.4%～99.8%,推导的氨基酸的同源性为68.6%～99.5%,且该基因与国内其他变异株有完全一致的缺失特征。结论这两株分离株均属于PRRSV美洲型变异株,为该病的防治及疫苗的设计奠定理论基础。

摘要：根据B组轮状病毒(GBRV)WH-1株nsp2基因的全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到nsp2基因的编码区.将其片段克隆到原核表达载体pGEX-KG上,经IPTG诱导,在***5α菌株中得到高效表达.表达的GST融合蛋白大小为61×103,经SDS-PAGE分离纯化,免疫小白鼠制备了多克隆抗体.抗体经1∶3 000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号.所表达的蛋白和制备的抗体可用于蛋白结构和功能的进一步研究.

摘要：为了快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp2基因缺失流行株,在对不同PRRSV分离株nsp2基因核苷酸序列分析的基础上,设计了针对nsp2基因的1对兼并PCR引物和1条基因特异性反转录引物。RT-PCR试验结果表明,经典PRRSVS1毒株和高致病性nsp2缺失株SY0608毒株的PCR扩增片段的大小分别为768 bp和678 bp。特异性试验和敏感性试验证明,该检测方法特异性较好,但敏感性相对较低,可用于快速鉴别诊断PRRSVnsp2基因缺失毒株和经典PRRSV毒株。

摘要：猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(nsp2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对nsp2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细胞噬性,调节宿主免疫以及在疫苗应用等相关研究进行综述,为深入研究PRRSV致病机理和疫苗设计提供重要理论基础。

摘要：从内蒙古某猪场患高热症病猪病料中分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR法鉴定证明,该病毒为美洲型PRRSV,将其命名为NM1。应用设计的特异性引物扩增NM1株的nsp2基因,并与国内外PRRSV分离株的nsp2基因序列进行了比较。结果表明,NM1株nsp2基因推导的氨基酸序列出现30个不连续的缺失,与PRRSV高致病性毒株HuN4、HuB2、JXA1的核苷酸序列同源性分别为99.1%、99.0%和98.9%。动物回归试验结果显示,人工感染的5头仔猪全部发病,其中3头死亡,说明NM1株为发生变异的PRRSV,其致病力有所增强。

摘要：为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的经典型和高致病性毒株,试验采用RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的PRRSVnsp2基因序列设计1对特异性引物,针对经典型毒株与高致病性毒株分别扩增出相应的576bp、486bp的目的片段,并对4份阳性病料扩增的部分nsp2基因进行序列测定。结果表明:RT-PCR方法快速、敏感、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,通过序列的测定分析发现所得部分nsp2基因有相同的缺失,从而补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据。

摘要：本研究采集山西省不同地区的发病猪脏器组织与血液样品,采用特异性RT-PCR方法检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)样品16份,应用设计的特异性引物扩增出nsp2基因序列,利用DNAStar生物信息学分析软件,对获得的序列与国外代表毒株VR-2332、国内代表毒株CH-1a、BJ-4、HB-1及PRRSV变异毒株HuN4和JXA1的序列进行了比较,绘制系统发生树。氨基酸序列比较分析发现山西省流行毒株同源性分别在69.8%～71.7%、85.3%～87.9%、68.7%～70.6%、91.7%～94.3%、94.3%～98.5%、95.1%～98.9%。所获得的16株病毒之间的同源性在90.9%～100%之间。研究结果发现所获得的序列同源性与国内近几年流行的PRRSV的变异毒株HuN4和JXA1毒株的序列同源性最高,分别在94.3%～98.5%与95.1%～98.9%之间,nsp2基因缺失位置一致,其nsp2均有2个部位出现了缺失,即nsp2基因分别为编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失和编码29个氨基酸的连续87个核苷酸的缺失,结果表明,山西省目前流行PRRSV的变异毒株与国内流行株属于同一分支。

摘要：从唐山某猪场患高热病病料中分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型PRRSV,将其命名为TS02。应用设计的特异性引物扩增TS02株的nsp2基因,并与国内外PRRSV分离株的nsp2基因序列进行了比较。结果表明,TS02株nsp2基因推导的氨基酸序列出现30个不连续的缺失,与PRRSV高致病性毒株JXA1、GD、WUH1、Jiangxi-3的核苷酸序列同源性分别为97.7%、97.7%、96.5%和97.1%。

摘要：从天津市病猪中分离得到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为TJ-S1、TJ-S2和TJ-S3。根据GenBank中PRRSV BJ-4株的基因序列设计并合成针对nsp2基因高变区的引物,RT-PCR扩增目的基因并将其克隆到pGEM-T载体进行测序,并与国内外已发表的毒株序列进行比较。结果表明,3个毒株都是美洲型PRRSV,而且TJ-S1、TJ-S2株的nsp2基因发生30个氨基酸的不连续缺失;基因系统发育树分析表明,TJ-S1株、TJ-S2株与HuN株、SD-14株的亲缘关系很近,TJ-S3株与CH-1a株的亲缘关系较近。

摘要：为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）贵州PT分离株nsp2基因序列特征,选择PRRSV JXA1株nsp2基因保守区域设计并合成特异性引物,用RT-PCR方法扩增出PRRSV贵州PT分离株nsp2基因片段,克隆至pMD18-T载体并测序,应用DNAStar、PSORTⅡ、TMHMM、MLRC等软件对nsp2序列的理化参数、同源性、亲水性、表面可及性、抗原性和亚细胞定位等进行分析和预测。结果显示,该基因cDNA长588bp,蛋白理论分子质量为21.5674ku,理论pI值为5.02,为不稳定蛋白,具有良好的形成抗原表位的条件。亚细胞定位结果表明该蛋白极有可能位于细胞核,其nsp2基因与所选18个毒株相应片段的同源性为80.0%~99.8%。预测nsp2蛋白具有良好的抗原性,在PRRSV的流行过程中,nsp2基因不断发生遗传变异,产生新的变异序列。