摘要：背景:干细胞特异性基因oct-4在维持干细胞功能和调节干细胞的分化过程中起着关键性作用,了解前列腺癌干细胞中oct-4的表达,对前列腺癌的预后、复发和耐药的评估具有重要意义。目的:观察oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中的表达。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02/10在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。材料:取12例前列腺癌患者手术后组织标本,其中6例在手术前没有经过化疗和激素治疗,另外6例患者经过激素治疗出现抵抗而手术。方法:制备前列腺癌组织单细胞悬液,流式细胞仪分选未经治疗前列腺癌和治疗后出现耐药的前列腺癌干细胞,RT-PCR和Western blot检测激素非依赖性前列腺癌oct-4基因和蛋白的表达。主要观察指标:激素依赖和非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+以及CD133-/CD44-细胞的比例;oct-4基因和蛋白在激素非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+、CD133+/CD44-、CD133-/CD44+、CD133-/CD44-细胞的表达。结果:流式细胞仪检测显示未经过治疗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞占(0.83±0.21)%,而CD133-/CD44-细胞多达(95.62±1.35)%;治疗出现激素抵抗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞为(54.62±0.86)%,而CD133-/CD44-细胞为(9.56±0.47)%;与其他亚群细胞相比,激素非依赖性前列腺癌CD133-/CD44-细胞oct-4基因和蛋白显著降低(P0.05)。结论:oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中高表达,可能与前列腺癌的预后和耐药有关。

摘要：背景:已证实将血管内皮细胞与具有良好组织相容性的生物材料复合,并移入体内后可增殖分化形成血管。但由于获取内皮细胞时创伤较大,所以细胞来源是一个急需解决的问题。目的:探讨羊水来源oct-4阳性胎儿间充质干细胞分化为内皮细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心完成。材料:羊水标本来自孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得60mL羊水。方法:采用免疫磁珠细胞分选法去除人羊水细胞中CD44和SSEA-4阳性细胞,使oct-4阳性胎儿间充质干细胞间接得到分离,并在体外进行培养扩增。取第3代羊水来源oct-4阳性胎儿间充质干细胞,诱导组换用含体积分数为15%胎牛血清的内皮细胞生长培养液,对照组持续用原培养液培养细胞。主要观察指标:倒置相差显微镜观察诱导过程中细胞形态变化,采用间接细胞免疫荧光法、内皮细胞吞噬DiI-acLDL法检测诱导效果。结果:诱导30d后,镜下观察细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观,经诱导的羊水来源oct-4阳性胎儿间充质干细胞可在体外保持良好的增殖活力。诱导后的贴壁细胞eNOS和vWF呈阳性表达,细胞胞浆内可见发出红色荧光的DiI阳性细胞;对照组细胞免疫荧光染色eNOS和vWF均呈阴性,且无红色荧光细胞出现。结论:羊水来源的oct-4阳性的胎儿间充质干细胞在适当的体外微环境下,可诱导分化为血管内皮细胞。

摘要：背景:目前对干细胞的体外分离纯化技术大多是建立在对细胞表面标记识别的基础之上,包括单抗贴壁铺展法、流式细胞分选法、免疫磁珠分选法等,但操作复杂,价格昂贵。目的:观察两步法分离和培养人羊水来源胚胎间充质干细胞的生物学特征。设计、时间及地点:开放性实验,于2008-03/2009-03在新疆医科大学干细胞研究室完成。材料:10例羊水标本来自怀孕16～22周行产前诊断或自愿引产的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得20～40mL羊水。方法:采用改进的两步培养法分离和培养人羊水间充质干细胞,首先同一步法将羊水标本离心、接种、培养至出现梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落。然后将上清培养液转移至新的25cm2培养瓶中继续培养,至出现梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落且达70%汇合后消化,改用α-MEM培养基,同样添加碱性成纤维细胞生长因子,接种培养,记为第1代。主要观察指标:①原代及传代羊水间充质干细胞形态学变化。②羊水间充质干细胞细胞核型、细胞周期、生长曲线和集落形成能力测定。③流式细胞仪、免疫荧光和RT-PCR检测表面抗原和细胞因子。结果:实验成功分离、培养和传代人羊水间充质干细胞。①孕中期羊水细胞原代培养平均7d可见散在的梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落;传代细胞在12h内完全贴壁,经过一两天潜伏期后增殖迅速,培养六七天可达90%融合,细胞排列有一定的方向性,呈漩涡状、辐射状排列,细胞为长梭形,相互之间界限不清。②两种方法得到的羊水间充质干细胞染色体核型为正常二倍体核型;生长曲线均呈S形,但两步法在第(6.1±0.5)天就达到高峰,显著快于一步法第(7.2±0.6)天(P=0.035)。流式细胞仪检测结果显示两步法羊水P3细胞S期细胞占(14±2.3)%,显著多于一步法(9.0±1.4)%(P=0.031)。两种方法获得的羊水间充质干细胞低密度种植7d后,均可形成散在的细胞集落,但两步法集落形成率为(15.0±2.3)%,显著多于一步法(10.0±1.8)%(P=0.021)。③流式细胞仪检测结果显示,羊水间充质干细胞表达CD44、CD29、CD105,而CD34、CD45、HLA-DR阴性;免疫荧光检测表明羊水中含有oct-4阳性细胞,但两步法羊水间充质干细胞中oct-4阳性细胞比例为(1.2±0.3)%,显著高于一步法(0.9±0.2)%(P=0.041);RT-PCR分析表明两种方法获得的羊水间充质干细胞均表达oct-4。结论:人羊水中也存在间充质干细胞,两步培养法是一种高效、简便实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法。