摘要：目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质粒pET-omp25与pET-omp31,进行酶切鉴定与基因序列测定后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导表达,omp25与omp31蛋白主要以包涵体形式存在;将目的蛋白纯化,应用Western blot进行蛋白活性的检测。结果纯化的目的蛋白具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为包被抗原,在确定了omp25与omp31蛋白最佳配比为4∶1、抗原最佳包被浓度为10μg/mL、血清的最佳稀释倍数为1∶50倍稀释、临界值为0.314的基础上,建立羊布鲁氏菌病抗体间接ELISA诊断方法并组装成诊断试剂盒,并将试剂盒进行了特异性、敏感性、重复性、符合率试验、血清交叉反应性等检测。结论研制的羊布鲁氏菌病抗体ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,可重复性,可应用于临床样本检测。

摘要：为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白omp31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和omp312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,omp31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。

摘要：对三株布鲁氏菌内蒙古分离株的omp31基因进行克隆与序列分析。参照GenBank中布鲁氏菌的omp31基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增布鲁氏菌omp31基因,对PCR产物进行克隆、测序,将测定序列拼接后与GenBank中获得的参考毒株omp31基因序列进行了比较。结果显示,三株布鲁氏菌分离株的omp31基因开放阅读框核苷酸序列同源性均为100.0%;与Brucella ceti B14/94、Brucella neotomae 5K33、Brucella suis1330三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最高,为100.0%;与Brucella canisRM6/66、Brucella melitensis183、Brucella melitensis16M三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.9%;与Brucella melitensis Rev1参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.6%;与Brucella ovis ATCC25840参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最低,为98.8%。