摘要：目的对非综合征型听神经病患者进行otof基因突变筛查,了解中国听神经病患者中otof基因的突变频谱。方法选取西京医院耳鼻咽喉头颈外科门诊2009-2018年确诊的听神经病患者248名以及听力正常的健康志愿者100名,采集外周静脉血提取全基因组DNA。针对otof基因全部48个外显子设计引物,采用聚合酶链式反应扩增外显子及其侧翼序列进行Sanger测序,应用Seqman软件与标准序列进行比对。结果 248例听神经病患者中共检出9种可能致病的变异方式,包括7种错义突变和2种剪切位置的变化。同时,检出4种已有文献报道的多态性改变。所有变异方式在健康志愿者中均未发现。结论可能致病突变集中于Exon40、Intron32、Exon12、Ex?on18、Exon24、Intron28和Exon7中,在门诊耳聋患者或者听力正常人群中,优先开展以上外显子的筛查。otof基因突变并不是患者唯一的致病原因,还应进行其他相关基因的筛查。

摘要：目的对散发听神经病患者进行otof基因突变筛查,了解中国听神经病患者中是否存在该基因的热点突变位点。方法选取解放军总医院门诊2003～2005年确诊的散发听神经病患者76例,采集患者外周静脉血,提取基因组DNA;选取otof基因已经报道的存在突变或位于突变附近的9个外显子,应用Primer5软件设计9对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)扩增,应用PCR产物直接测序法进行otof基因突变检测;使用DNAStar软件进行测序序列的对比分析。结果本研究共发现了otof基因的8种多态位点。1名温度敏感性听神经病患者检测到82769delAG缺失突变,位于otof基因第25外显子上的AG缺失突变导致氨基酸在993位发生改变,翻译截止于1000位氨基酸处,该患者并未检测到otof基因的其他突变。56842A/C、82885C/A、92905G/A为已知多态位位点,其中56842A/C和92905G/A多态在NCBI显示的不同人群的多态频率与本研究的多态频率无差异。2例患者发现76378C/T杂合突变(突变率2.63%)、3例患者发现82913G/A杂合突变(突变率3.95%),这两种突变分别位于第15内含子和第25内含子,考虑为本研究发现的新的单核苷酸多态。11例患者发现92995C/T杂合突变(突变率14.47%),5例患者发现96888C/T杂合突变(突变率6.58%),这两种突变分别位于第39外显子和第44外显子,但均没有引起氨基酸的改变。结论本研究在散发听神经病患者中发现了8种otof基因多态位点,并未发现国外报道的已知突变,这意味着中国听神经病患者可能存在otof基因新的突变,或者存在其它相关致病基因。

摘要：目的进行与遗传性听神经病相关的新致病基因的定位克隆研究以期发现新的听神经病基因;进行中国散发听神经病患者分子流行病学研究。方法基因定位克隆研究对象是一个5代相传的X-连锁听神经病家系;otof及WFS1基因的突变筛查及分子流行病学研究对象是105名听力下降患者,其中明确诊断为听神经病的散发患者31例,男女比例16:15。患者最小年龄8岁,最大年龄42岁。门诊对照组共43人(其中各种原因导致的耳聋患者24人,包括药物性耳聋、前庭导水管扩大综合征等;听力正常19人);低频听力减退家系成员31人。研究方法包括连锁分析基因定位法和候选基因突变筛查方法,引物设计应用在线引物设计软件—Primer3,采取PCR扩增,直接测序的方法进行otof和WS1基因的突变检测。序列分析采用DNAStar软件。结果在国际上首次将X-连锁遗传性听神经病定位在X染色体上Xq23-27.3,并将其命名为AUNX1基因座。在WFS1基因的突变检测中发现两个新的突变位点:2766G/A杂合866D>N(天冬氨酸>天冬酰氨),2328A/G杂合,A→G720I>V(异亮氨酸>缬氨酸),为听神经病散发成员所特有。在otof基因的突变检测中发现听神经病散发患者有一个可以引起氨基酸改变的新的突变位点:3447G/T错义突变(1075D/Y天冬氨酸变成酪氨酸)。这个突变与国外报道的听神经病相关的otof基因突变位点不同,在我们初筛的31例病人中有6例为此种突变(￣20%),为一种新的突变形式。结论本研究发现与中国听神经病具有特异和相关的致病基因座位并建立了与听神经病相关基因的检测手段,为完善听神经病的分子遗传机制和进行临床听神经病的分子诊断提供了进一步的理论依据。