摘要：目的构建人细胞表面黏附分子p选择素(p-selectin)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,检测其转录活性,并应用于筛选药物对其转录活性的影响。方法根据UCSC软件查找的人基因组DNA的p-selectin启动子序列并设计两端引物,扩增人基因组DNA中的p-selectin启动子。用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和p-selectin启动子后,将p-selectin基因启动子插入到pGL3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-pselectin-promoter。将其与内参质粒p RL-SV40瞬时共转染293F细胞,检测双荧光素酶活性。对不同启动子片段长度的p-selectin报告基因进行双荧光素酶的检测。以炎症因子和药物分组刺激转染了报告基因质粒的293F细胞并检测双荧光素酶活性。结果成功构建p-selectin基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40组荧光素酶活性为0.8573±0.4703,高于转染pGL3-Basic/p RL-SV40组的荧光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比较于pGL3-1092 bp组和pGL3-3738 bp组具有最强的转录活性。炎症因子LpS和TNF-α和药物As2O3均具有上调pGL3-pselectin-promoter转录活性的作用。结论 pGL3-pselectin-promoter在293F细胞中能被转录激活,并验证了炎症因子对其转录表达的作用,并为药物筛选与评价提供解决方案。

摘要：目的观察黄芪注射液对高血压病(EH)患者血浆p选择素(psel)、血栓素B2(TXB2)和6酮前列环素F1α(6KetopGF1α)的影响。方法采用平行随机对照区组设计,EH患者138例,随机分为2组(黄芪组及常规治疗组);对照组为健康查体人员66例。放射免疫分析法测定各组中血浆psel、TXB2、6KetopGF1α的含量。黄芪组常规降压加黄芪注射液治疗14天后测定上述指标;常规治疗组患者经常规降压治疗14天后同时测定上述指标。结果EH患者与健康对照组比较血浆psel升高,TXB2升高(p<0.01),6KetopGF1α降低(p<0.05)。黄芪注射液治疗后EH患者血浆psel降低(13.21±3.47比9.14±4.09)μg/L,TXB2下降(281.7±56.3比245.4±59.7)ng/L,6KetopGF1α上升(25.1±5.3比30.3±6.9)ng/L(p均<0.01)。结论黄芪注射液可在较短治疗周期内改善EH患者血小板功能。

摘要：目的对流式细胞术（FCM）检测p选择素进行方法学性能评价。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件,结合工作实际,设计验证方案,对BD Aria流式细胞仪检测系统测定血浆p选择素的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围和生物可参考区间五大分析性能进行验证和评价,并将实验结果与厂家（美国BD公司）提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果 p选择素含量在39.06和10 000 ng/L时,批内变异系数分别为4.23%和9.00%,批间变异系数分别为4.63%和11.00%,准确度相对偏倚分别为2.71%和5.28%;检测灵敏度为7.88 ng/L,分析测量范围为7.88-103 928.00 ng/L,生物参考区间验证为4 512.20-10 250.00 ng/L。结论 BD Aria流式细胞仪检测系统检测血浆p选择素的分析性能符合厂家提供的性能指标和公认的质量指标。

摘要：目的 探讨生长停滞特异性蛋白6（growth arrest-specific protein 6,Gas6）对脓毒症小鼠凝血功能的影响.方法 建立盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture,CLp）诱导的脓毒症小鼠模型.将120只雄性清洁级BALB/c小鼠随机（随机数字法）分为假手术组、CLp脓毒症组、CLp脓毒症＋生理盐水组、CLp脓毒症＋Gas6（1μg）组、CLp脓毒症＋Gas6（3μg）组和CLp脓毒症＋Gas6（6μg）组,每组20只.经过不同处理后检测24 h凝血酶原时间（pT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（ApTT）、纤维蛋白原（Fbg）、D-二聚体（DD）和血小板（pLT）计数,采用ELISA检测血浆组织因子（TF）浓度、p选择素和细胞间黏附分子（ICAM-1）的变化.数据采用SpSS 18.0统计软件,两组样本比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析和Bonferroni检验.结果 与假手术组比较,CLp脓毒症组血浆pT、TT、ApTT、DD、TF、p选择素和ICAM-1延长或增高,Fbg和pLT降低（p=0.000）.尾静脉注射rmGas6（1、3、6μg）后脓毒症小鼠血浆pT （p =0.000）、TT （p =0.000）、ApTT （p=0.000）、Fbg （p =0.000）、DD（p =0.0002）、pLT （p=0.000）、IF （p=0.0002）、p选择素（p=0.001）和ICAM-1 （p=0.0004）延长或增高.结论 Gas6可能通过活化血管内皮细胞、上调脓毒症小鼠IF水平进一步激活凝血系统,加剧凝血功能障碍.

摘要：背景:已证实出血性血小板病患者血小板聚集功能存在缺陷,血小板膜糖蛋白在血小板聚集过程中具有重要作用。目的:以健康人作为正常对照,观察出血性血小板病患者血小板膜糖蛋白表达的变化。设计:病例-对照分析。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。对象:①选取2001-01/2003-03华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科和血液专科收治的79例出血性血小板病患者,男31例,女48例,平均年龄(35.76±14.14)岁,病程1～14年,符合1996年出血性血小板病的诊断标准,患者及其家属对本实验知情同意。共计167个出血部位,其中肢体皮肤瘀斑或瘀点64例,鼻出血33例,月经过多29例,齿龈出血28例,眼底出血8例,球结膜出血5例。②纳入标准:均有多部位出血临床表现;血小板计数、出血时间、凝血象检测无明显异常改变;根据出血部位,经内科、耳鼻喉科、妇科、口腔科和眼科等科室诊视,未发现特异诊断性病灶;血压、心率正常;经瑞斯托霉素检测,排除血小板无力症。③另选取健康献血员34例作为正常对照组,男15例,女19例,平均年龄(30.12±7.14)岁。方法:①血小板聚集率测定:以二磷酸腺苷(终浓度1.90μmol/L)、花生四烯酸(终浓度0.37μmol/L),血小板活化因子(终浓度150nmol/L)作为诱聚剂,采用Chronolog430型血小板聚集仪检测正常对照与出血性血小板病患者的血小板最大聚集率。血小板最大聚集率21%～40%为反应不良,低于20%为反应缺如。②血小板膜糖蛋白检测:患者取肘静脉血3.6mL,20g/L的乙二胺四乙酸二钠1:9抗凝,正常对照组标本以同法收集。分离血浆,收集血浆层,离心去上清,加多聚甲醛室温固定,调整血小板浓度为3×107L-1。取调整好的血小板溶液100μL,分别加入异硫氰酸荧光黄标记的CD42b(抗血小板膜糖蛋白Ⅰb)、CD41(抗血小板膜糖蛋白Ⅱb)、CD61(抗血小板膜糖蛋白Ⅲa)、CD42b/CD42a(抗血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ)、CD41/CD61(抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa)、CD62p(抗p-选择素)克隆抗体200μL,混匀后室温避光孵育30min,磷酸盐缓冲液补至终体积1mL,每个样本分析10000个血小板,于FACS420型流式细胞仪上测定荧光阳性百分标记率。主要观察指标:①血小板聚集率。②血小板膜糖蛋白的表达。结果:79例出血性血小板病患者与34例健康献血员全部进入结果分析。①每例出血性血小板病患者均对一项或多项诱聚剂诱导的聚集反应不良或缺如,而正常对照组血小板聚集检测均无异常发现。②与正常对照组比较,出血性血小板病患者血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ,Ⅱb/Ⅲa,Ⅰb,Ⅲa及p-选择素的荧光阳性标记率均明显降低(t=2.50～5.57,p均0.05)。结论:血小板膜糖蛋白表达异常可能是导致出血性血小板病的因素之一。

摘要：背景:骨肉瘤的术后转移是造成治疗失败的主要原因,而发生机制目前尚不明确。有研究证明黏附机制的失调在肿瘤的转移中起着重要的作用。目的:探讨CD44v6和p选择素在骨肉瘤组织中的表达特征及其与骨肉瘤术后侵袭转移的相关性。设计:采用非随机对照设计。地点和对象:以本院1994/2002间手术切除34例骨肉瘤标本和同期收治的10例骨软骨瘤作为研究对象。干预:采用流式细胞术对34例骨肉瘤组织和10例骨软骨瘤组织中的p选择素和CD44v6的表达进行荧光免疫检测。主要观察指标:肿瘤组织中CD44v6及p选择素阳性表达率。结果:在骨肉瘤组织中,CD44v6及p选择素阳性表达率明显高于骨软骨瘤;不同外科分期间的CD44v6和p选择素表达,差异有显著性意义;CD44v6和p选择素表达与骨肉瘤肺转移有明显相关性。结论:p选择素和CD44v6与骨肉瘤的侵袭、转移相关。可作为骨肿瘤恶性表型和预测骨肉瘤转移潜能的指标。

摘要：目的探讨溃疡性结肠炎不同时期选择素表达及其意义。方法采用前瞻性研究设计，选择2007年7—12月UC患者，采用组织匀浆及ELISA检测结肠黏膜不同时期内选择素的表达。结果①共29例资料完整患者进入资料统计整理；②活动期UC患者病变黏膜及正常黏膜p选择素表达均明显高于正常对照组（F=35．2，p〈0．01）；E选择素在UC患者正常及病变黏膜同样高表达，但两种选择素异常表达在病变黏膜及正常黏膜中无统计学差异（t=1．46和1．32，p〉0．10；③UC缓解期内p、E选择素高表达与uc复发频次关系密切（X^2=4．201和5．040，p〈0．05）。结论选择素p、E可能是uc发病重要炎性介质，在UC发病中可能无决定性作用。但选择素高表达可能与UC复发频次关系密切。

摘要：背景:血小板表面糖蛋白(glycoprotein,Gp)Ⅱb/Ⅲa受体是评价血小板活化的重要指标,具有活血化瘀作用的中成药红花注射液对该指标的影响对于探讨其抗血小板凝集作用机制及疗效有重要意义。目的:观察红花注射液对急性冠状动脉综合征患者血小板表面糖蛋白GpⅡb/Ⅲa受体的影响,探讨红花注射液在抗血小板凝集治疗中的作用及其机制。设计、场所、对象和干预措施:选择2008年9月至2009年5月在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院心血管内科住院的急性冠状动脉综合征患者64例,用随机数字表法分为红花注射液治疗组(32例,常规西药加红花注射液)与对照组(32例,常规西药),两组疗程均为14 d。主要结局指标:采用免疫荧光标记法和流式细胞仪检测治疗前后血小板活化标志物GpⅡb/Ⅲa复合物(CD41)、p选择素(CD62p)和溶酶体膜糖蛋白(CD63)的表达,同时观察红花注射液对急性冠状动脉综合征患者心绞痛症状及近期预后的影响。结果:对照组中有4例患者因提前出院而退出试验。对照组和治疗组的CD41比例、CD41抗体荧光量治疗后比治疗前均有所降低,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.01);治疗后治疗组CD41比例、CD41抗体荧光量低于对照组(p<0.05);两组CD62p比例和CD63比例治疗后均呈现出一定的下降趋势,但与治疗前比较差异无统计学意义。两组患者在住院14 d中均未发生死亡、心肌梗死、脑卒中事件,红花注射液治疗组患者心绞痛症状缓解和心电图表现均明显好于对照组。结论:红花注射液具有抑制血小板膜糖蛋白GpⅡb/Ⅲa受体表达的作用,对急性冠状动脉综合征患者心绞痛具有很好的缓解作用,可增强常规西药抗血小板活化的作用。