摘要：根据GenBank中副猪嗜血杆菌(HpS)的p2蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用p2-pCR方法从HB070214株中克隆了1 077bp的p2蛋白基因。将p2蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-p2,在IpTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为60 500的可溶性融合蛋白p2-His;经SDS-pAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的30%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达92.5%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗HpS p2蛋白抗体的间接ELISA方法(p2-ELISA),并用所建立的p2-ELISA与国外进口的HpS检测试剂盒Synbiocits-ELISA对196份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为93.4%。结果表明,本试验建立的p2-ELISA与Synbiocits-ELISA具有同样高的特异性。