摘要：Functional manipulation of biosynthetic enzymes such as cytochrome p450 s(or p450 s) has attracted great interest in metabolic engineering of plant natural *** and mogrosides are plant triterpenoids that share the same backbone but display contrasting *** structural and functional diversity of the two metabolites can be manipulated by engineering p450 ***,the functional redesign of p450 s through directed evolution(DE) or structure-guided protein engineering is time consuming and challenging,often because of a lack of high-throughput screening methods and crystal structures of p450 *** this study,we used an integrated approach combining computational protein design,evolutionary information,and experimental data-driven optimization to alter the substrate specificity of a multifunctional p450(CYp87 D20)from *** three rounds of iterative design and evaluation of 96 protein variants,CYp87 D20,which is involved in the cucurbitacin C biosynthetic pathway,was successfully transformed into a p450 mono-oxygenase that performs a single specific hydroxylation at C11 of *** integrated p450-engineering approach can be further applied to create a de novo pathway to produce mogrol,the precursor of the natural sweetener mogroside,or to alter the structural diversity of plant triterpenoids by functionally manipulating other p450 s.

摘要：考察加味佛手散及其不同药物组合对大鼠肝脏p450酶活性及肝细胞形态的影响。大鼠灌胃给药4周后处死,制备肝微粒体,采用肝微粒体体外孵育"鸡尾酒"法,HpLC-MS/MS法测定代谢产物,考察各受试组肝脏p450酶活性,HE染色观察用药前后肝组织病理变化。与对照组相比,加味佛手散组CYp1A2,CYp3A4的酶活性显著升高(p<0.05);阿魏酸+川芎嗪组、川芎嗪+延胡索乙素组CYp1 A2,CYp2 C9,CYp2 D6,CYp2 E1,CYp3 A4的酶活性显著升高(p<0.05);川芎嗪组CYp1A2,CYp2D6,CYp2E1的酶活性显著升高(p<0.05);阿魏酸组CYp3A4的酶活性显著降低(p<0.05)。用药后阿魏酸和川芎嗪组肝细胞形态正常,延胡索乙素组肝小叶界限不清,肝细胞排列紊乱,边缘模糊,细胞核大小不均,炎细胞浸润。阿魏酸+延胡索乙素、川芎嗪+延胡索乙素、加味佛手散组有炎细胞浸润,但病理变化程度明显较延胡索乙素组轻微,其中加味佛手散组最轻。研究结果表明加味佛手散对大鼠肝脏的CYp1A2,CYp3A4的酶活性具有诱导作用,川芎嗪可能是加味佛手散对CYp1A2产生诱导作用的效应物质。配伍阿魏酸、川芎嗪后可降低延胡索乙素对大鼠肝脏的毒性作用。

摘要：采用快速有效的数学统计方法对工程菌产细胞色素p450BM3的发酵条件进行了优化.首先利用plackett-Burman设计从众多影响产p450BM3的因素中筛选出影响较大的4个因素:FeCl3含量、诱导时机、诱导时间和接种量.在此基础上再利用响应面法中的杂合设计进行优化,通过拟合得到响应曲面函数,获得了最佳的实验条件.在该实验条件下,p450BM3酶活从37.6×10-3U·ml-1提高到57.9×10-3U·ml-1.

摘要：目的　获得白纹伊蚊细胞色素p45 0CYp6N亚家族新成员 5’ -及 3’ -非翻译区 (untranslatedregion ,UTR)核苷酸序列 ,并进行功能分析。方法　以本文作者已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素p45 0CYp6基因cDNA片段 ,设计 1对特异性引物 ,以反向引物 ,进行 5’ -cDNA末端快速扩增 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE) ,以正向引物进行 3’ -RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定 ,以获得 5’ -UTR和 3’ -UTR ,并运用pC/GENE软件分析其功能。结果　获得CYp6N亚家族中两个新成员 5’ -UTR及 3’ -UTR ;其结构特征包括 :两个新成员前导序列均为 46个核苷酸 ;起始密码子ATG两侧核苷酸 - 3位是A、+ 4位是T ;5’ -UTR区域无稳定性的发卡结构 ;终止密码子在CYp6N3为TAA、在CYp6N4为TAG ,紧挨其 3’端核苷酸分别为A和G ,翻译产物羧基端均为亮氨酸。结论　成功地获得了白纹伊蚊细胞色素p45 0CYp6N亚家族两个新成员 5’ -及 3’ -非翻译区序列 ,进一步分析表明该两个新成员均能进行有效翻译 ,昆虫细胞色素p45 0基因翻译起始调控与翻译终止调控有部分类似于脊椎动物mRNA的翻译调控 ,但具有多态性的特点。

摘要：综述了细胞色素p 450的种类和功能多样性,介绍了细胞色素p 450参与除草剂代谢及其作用机理.同时,简述了细胞色素p 45014DM与杀菌剂特异性作用的机制.报道了我们从抗除草剂的瑞士黑麦草中克隆CYp 81B 1同源基因及其功能的研究,以及柑橘绿霉菌细胞色素p 45014DM基因的克隆表达.为深入研究杀菌剂作用细胞色素p 45014DM的机理从而设计以p 45014DM为特异性靶标的新型农药、以及进一步研究细胞色素p 450酶系与除草剂代谢的关系打下了良好的基础.

摘要：为了提高细胞色素单加氧酶p450 BM-3的热稳定性,采用半理性设计策略对该酶进行了分子改造。首先采用B-FITTER软件分析了p450 BM-3晶体结构中各氨基酸残基位点的温度因子(B-factor),识别出了一个对酶的热稳定性有不利影响的关键氨基酸残基位点G46,然后以p450 BM-3(A74G/F87V/L188Q/D422G)为亲本酶在该位点进行定点饱和突变构建了突变文库,并从饱和突变文库中筛选获得了一个热稳定性得到显著提高的突变酶p450BM-3(A74G/F87V/L188Q/D422G/G46S)。该突变酶(G46S)的半失活温度(T5010)比亲本酶提高了5℃(达到48℃;在50℃的半衰期t1/2比亲本酶延长了一倍。同时,突变酶的酶学性质也得到明显改善,与亲本相比,突变酶Km降低了22%,kcat提高了90%,催化效率kcat/Km(67.42 L?(mmol?min)-1)比亲本提高了1.48倍。这说明G46位点不仅影响酶的热稳定性,还影响酶对底物的结合与催化性能。G46S突变酶的获得表明,只要采用适当的半理性设计策略对正确的位点进行分子改造,可以在提高酶的热稳定性的同时,保持或甚至提高酶的催化活性。

摘要：根据p45 0保守序列设计简并引物 ,从亚洲棉 (GossypiumarboreumL .)cDNA文库中分离到两个肉桂酸_4_羟化酶 (C4H)同源cDNA克隆。这两个棉花p45 0被划分到CYp73A亚族中 ,分别被命名为CYp73A2 5和CYp73A2 6。它们各编码 5 0 5个氨基酸残基 ,彼此之间的氨基酸序列同源性为 91.3%。它们与其他植物C4H的同源性高达 90 %以上。RT_pCR分析表明 ,CYp73A2 6在棉花的花瓣、花萼果皮及发育种子中均有较高水平的表达。CYp73A2 5在花瓣、花萼和果皮中有较强表达 。

摘要：以赤点石斑鱼 (Epinephelusakaara)脑垂体中提取的RNA为模板 ,根据芳香化酶的保守序列设计引物 ,利用GeneRacerTM 技术 ,克隆出两种芳香化酶即脑芳香化酶 (p4 5 0aromB)和性腺芳香化酶 (p4 5 0aromA)的cDNA ,其全长分别为 190 1bp (编码 5 0 9aa)和 1833bp (编码 5 18aa)。序列分析结果表明 ,赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA序列的同源性为 5 1 6 % ,氨基酸序列之间同源性为 6 2 5 % ,与斜带石斑鱼两种芳香化酶氨基酸同源性分别为 94 7%和 97 9%。对 8个科的 10种鱼进行了分子系统进化树分析 ,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。以特异性引物扩增雌、雄赤点石斑鱼各种组织 (垂体、嗅球、端脑、下丘脑、中脑、后脑、延脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、性腺、鳃、胃、肠、皮肤、脂肪、肌肉、头肾、胸腺、鳔 ) ,以β actin作内标比较各组织芳香化酶基因表达量的差异 ,结果表明 ,赤点石斑鱼脑芳香化酶 (p4 5 0aromB)有广泛的组织分布 ,脑和垂体的表达量很高 ,各组织表达量有明显的雌、雄差异 ;而性腺芳香化酶 (p4 5 0aromA)表达主要集中于垂体和性腺 ,且不论雌雄 ,其性腺表达量均高于脑垂体 ,和p4 5 0aromB的表达模式明显不同 ,表现为在脑部 ,p4 5 0aromB表达量高于p4 5 0aromA ,而在性腺 ,

摘要：数码相机的快速普及，让用户冲印照片的方式发生了很大的改变。普通用户除了去数码冲印店外，还可以在家里使用照片打印机直接打印拍摄的照片。针对这部分用户，几大打印机厂商都推出了功能、价位不同的产品来满足用户的需要。除了打印品质，如何让用户更方便、更快地打印出数码照片成为了打印机厂商追求的重点，利盟最新推出的p450便携式照片打印机就体现了这种设计思想。p450是目前惟一一款集成了CD刻录机的专用A6照片打印机，用户可以用它来共享和存取CD光盘上的数码照片。