摘要：根据GenBank中公布的人多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶10(parp10)cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR扩增293FT细胞mRNA,获得parp10cDNA。将获得的cDNA克隆到pCMV-Myc和pEGFP-C1中,用免疫沉淀和激光共聚焦实验验证了parp10和β-actin存在相互作用。然后,通过RT-PCR法发现该基因在小鼠体内表达的组织分布,组织表达谱显示该蛋白在各组织中均有表达;Westernblotting分析表明,UV造成的细胞损伤能够引起parp10表达水平的增高。parp10组织表达谱的确定,与β-actin相互作用的验证以及对UV的应激反应都为进一步研究parp10的生物学功能奠定了基础。

摘要：目的:合成并筛选有效抑制parp10表达的siRNA。方法:根据parp10 cDNA序列,设计并合成prap10基因潜在的RNA干扰(RNAi)片段,将合成的寡核苷酸序列构建到pEGFP-C1H1U6载体中;通过双萤光素酶试验、Western blotting筛选有效的干扰序列;进一步用G418对A549细胞进行耐受度筛选,确定最低耐受度;用G418溶液对转染RNAi重组质粒的A549细胞进行筛选,通过RT-PCR鉴定干扰效果。结果:针对617bp处所构建的RNAi载体能够抑制parp10的表达,用浓度为400μg/mL G418的McCoy′s 5A培养基筛选转染后的细胞,获得了能够表达绿色荧光标签蛋白的A549细胞株,经RT-PCR检测发现,parp10表达受到抑制。结论:获得了能够有效抑制parp10表达的特异性小干扰RNA(siRNA),为进一步研究其生物学功能提供了条件。