摘要：目的检测晶状体诱导基洲pax6和Six3在品状体摘除术后再生过程中的表达，探讨这两种基l大I与晶状体蛋白表达及细胞纤维化的关系。设计实验研究。研究对象48～53期非洲爪蟾蝌蚪。方法实验组：选取发育正常的蝌蚪对其单侧的眼施以品状体摘除手术；对照组：未做手术的另一侧币常眼。采用免疫荧光、蛋白印迹、qRT—PCR检测再生品状体的眼睛中pax6、Six3的表达情况。主要指标pax6、Six3蛋白的表达水平。结果与对照组相比，晶状体被摘除后随着时间推移逐渐再生。术后0-3天pax6与six3表达上升；术后3～14天，pax6的表达先升高后降低，Six3表达下降，品状1奉囊形成；术后14-21天，pax6的表达持续降低，Six3的表达升高；术后21～30天，pax6与six3的表达下降，品状体结构日趋完整。结论晶状体再生的l芙键事件是部分角膜细胞去分化和晶状体蛋白表达。再生早期在pax6和Six3的共同作用下外角膜内层细胞转分化形成品状体囊，这两种基因也与后期晶状体蛋白表达及细胞纤维化的调控有密切关联。（跟科，2016,25：232—237）

摘要：目的检测在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中,眼发育调控基因pax6及其下游促分化基因MATH5和BRN3b在蛋白水平的表达情况,从而探讨pax6基因在RB分化过程中的作用。设计病例对照研究。研究对象新鲜RB组织10例,正常视网膜组织10例。方法实验组:RB组织;对照组:正常视网膜组织。采用WesternBlot法检测新鲜视网膜母细胞瘤组织和正常视网膜组织中pax6、Math5、Brn3b蛋白质水平的表达情况并作比较。主要指标pax6、Math5、Brn3b蛋白质的表达水平。结果本研究中RB组织和正常视网膜组织中均可检测出pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达。与正常视网膜组织相比较,RB组织中pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达水平增高(P均<0.001);Math5与pax6蛋白表达具有线性相关性(r=0.949,P<0.001),Brn3b与Math5蛋白表达具有线性相关性(r=0.927,P<0.001)。结论在RB组织中,pax6基因上调下游促分化基因MATH5和BRN3b表达水平,促进RB组织的分化。

摘要：目的探讨眼发育调控基因pax6在人视网膜母细胞瘤中的表达情况。设计实验性研究。研究对象新鲜视网膜母细胞瘤肿瘤组织6例,正常视网膜组织6例,视网膜母细胞瘤细胞株2例。方法采用逆转录酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹方法检测视网膜母细胞瘤肿瘤组织中pax6 mRNA和pax6蛋白的表达,以正常视网膜组织作为对照。同时检测SO-Rb50、Y79视网膜母细胞瘤细胞株中pax6 mRNA和pax6蛋白的表达情况。主要指标视网膜母细胞瘤新鲜肿瘤组织及细胞株中pax6基因的表达。结果RT-PCR和Western蛋白印迹检测显示,在6例视网膜母细胞瘤肿瘤组织及两种视网膜母细胞瘤细胞株中均可见pax6 mRNA及pax6蛋白表达。与正常视网膜组织相比较,视网膜母细胞瘤肿瘤组织中pax6 mRNA及pax6蛋白表达水平增高(P均<0.01)。结论pax6基因的异常表达可能参与并导致人眼视网膜母细胞瘤的发生和发展。

摘要：目的探索视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞pax6的表达变化及意义。设计实验研究。研究对象缺血再灌注损伤大鼠视网膜。方法成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠30只,随机选取5只作为空白对照组,其余25只为视网膜缺血再灌注损伤组,采用升高右眼眼压的方法制作视网膜缺血再灌注损伤模型。视网膜缺血再灌注后1、2、4、6、8周分5组,每组5只,不同时间点取右眼行免疫荧光染色,观察视网膜神经节细胞中pax6表达情况。主要指标pax6的表达。结果视网膜缺血再灌注损伤后随着时间推移视网膜各层逐渐出现pax6表达阳性的细胞,对照组视网膜神经节细胞pax6表达阳性率为(1.28±1.41)%,损伤后1、2、4、6、8周分别为(0.99±1.23)%、(14.45±2.72)%、(50.88±4.73)%、(71.00±4.72)%、(78.80±4.62)%(F=1.350,P<0.0001)。各组与对照组两两比较,缺血后1周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率差异无统计学意义(P=0.835),缺血再灌注损伤2、4、6、8周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率均明显升高(P均<0.0001)。结论视网膜缺血再灌注损伤后视网膜各层均出现pax6表达阳性细胞,视网膜缺血再灌注损伤能诱导视网膜内源性干细胞激活。

摘要：目的检测pax6、Ki-67及MMP-9在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达,探讨其与RB临床组织病理学特征之间的关系及临床意义。设计实验性研究。研究对象石蜡包埋RB组织40例,其中<3岁组27例,≥3岁组13例。方法采用免疫组织化学Elivision法检测pax6、Ki-67及MMP-9在40例RB组织中的表达情况,分析该3种蛋白表达与患者性别、眼别、年龄、视神经受侵情况以及是否化疗等临床组织病理学特征的关系,并分析3种蛋白表达之间的相关性。主要指标RB组织中pax6、Ki-67、MMP-9的表达及临床组织病理学特征。结果 40例RB组织中,pax6、Ki-67及MMP-9的阳性表达率分别为52.5%、55.0%、57.5%。Ki-67在年龄大于3岁组的阳性表达率高于年龄小于3岁组(χ2=6.825,P=0.016),pax6(χ2=0.631,P=0.511)及MMP-9(χ2=0.129,P=1.000)的表达与年龄无显著相关性。3种蛋白的表达均与性别及眼别无显著相关性。pax6、Ki-67及MMP-9在球后视神经受侵袭组的阳性表达率均高于未受侵袭组(χ2=14.401,P=0.017;χ2=11.831,P=0.046;χ2=13.961,P=0.038)。pax6及Ki-67在未化疗组的阳性表达率均高于化疗组(χ2=8.120,P=0.010;χ2=6.465,P=0.025)。pax6和Ki-67的表达呈正相关(r=0.347,P=0.028)。结论 pax6的高表达促进了RB细胞的增生;pax6、Ki-67和MMP-9的高表达与RB的侵袭有一定的相关性;化疗对RB中pax6和Ki-67的表达有一定的抑制作用,在一定程度上可以降低RB侵袭转移的风险。

摘要：目的体外构建人pax6基因的shRNA慢病毒载体并鉴定。方法实验研究。设计pax6基因特异性siRNA靶点,构建pax6 shRNA重组质粒,构建表达FLAG tag、pax6以及红色荧光蛋白报告基因的融合蛋白表达质粒,经Western Blot加以验证,使用293T细胞进行有效靶点的外源筛选。构建慢病毒pGCL-GFP载体,在293T细胞中包装病毒,将shRNA重组病毒感染人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),检测B3细胞pax6蛋白表达情况,从而筛选有效靶点。根据pax6基因的4个候选RNAi靶序列,构建shRNA重组质粒,并构建FLAG tag、pax6、红色荧光蛋白融合蛋白的表达系统。结果经验证外源pax6基因,发现3个候选靶点是有效的RNAi靶点,能使pax6蛋白表达水平显著降低。在此基础上构建的pax6 shRNA重组慢病毒载体,显著抑制了HLE-B3细胞pax6蛋白的内源性表达。结论成功构建了人pax6基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为后续探讨pax6对晶状体上皮细胞的生物学作用奠定了基础。

摘要：Paired box 6(pax6)是1段高度保守基因,在调控脊椎动物眼睛发育的过程中起到重要的作用。Paired box 6variant(pax6variant,VP)是花背蟾蜍体内的pax6基因家族的同源基因。本实验主要关注非洲爪蟾pax6基因与花背蟾蜍vp基因之间的异同,两者对细胞增殖、周期调控及细胞命运决定的影响,以及相关位点改变对增殖及其下游的影响,以此来预测具体起主要功能的位点。分别对pax6和VP 2种蛋白进行磷酸化位点预测及序列比对后发现,在蛋白VP中,不论是可能的磷酸化位点还是可以对其进行磷酸化的激酶识别位点都发生了显著减少,这些都是位于C末端的PST结构域发生的重大改变。针对其不同的磷酸化位点设计的点突变结构,推测该基因的变化是以373位磷酸化位点为主导,其他磷酸化位点对其有相应的影响。