摘要：目的 优化艾椒黄乳膏的制备工艺,观察其对银屑病小鼠皮损的改善作用。方法 以硬脂醇、凡士林、月桂醇硫酸钠、甘油用量为考察对象,以外观性状和物理稳定性为评价指标,采用L_(9)(3^(4))表正交实验设计,优化艾椒黄乳膏的制备工艺,并以咪喹莫特诱导的银屑病小鼠为模型,比较艾椒黄乳膏与艾椒黄洗剂对银屑病小鼠皮损面积和严重程度(psoriasis area and severity index, PASI)评分、皮肤病理变化、皮损处增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, pcna)表达和皮损处皮肤IL-17和IL-23水平的影响。结果 最佳处方为硬脂醇1.8g,凡士林2.0g,月桂醇硫酸钠0.15g,甘油0.575g。药效学实验表明,艾椒黄乳膏可使咪喹莫特诱导的银屑病小鼠皮损处皮肤变薄、炎症减轻,pcna表达下降,皮损皮肤中IL-17和IL-23水平降低,相较于艾椒黄洗剂更优。结论 该研究筛选的艾椒黄乳膏制备工艺稳定,乳膏质地细腻,便于携带,可明显改善银屑病小鼠皮肤的皮损现象。

摘要：目的观察中波紫外线(UVB)辐射后HaCaT细胞光产物胸腺嘧啶二聚体(cyclobutanepyrimidine dimers,CPDs)的生成和清除情况及3种中药活性成分:黄芩(baikal skullcap root,BSR)、川芎(szechwan lovge rhizome,SLR)和表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对该过程的干预情况并探讨上述药物对相关调控分子的作用机制。方法以含10%小牛血清的RMPI1640培养基培养永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞,根据实验设计定时定量照射培养细胞并预先或UVB辐射后加入相关药物进行干预处理。免疫组织化学法检测CPDs;RT-PCR法检测受试各组细胞p53和pcna基因mRNA表达;Western blot法检测受试各组细胞p53和pcna蛋白表达。结果HaCaT细胞损伤程度随照光剂量加大而加重;30mJ/cm2UVB照射后细胞CPDs生成量在辐射后0.5h左右达到高峰,同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,照光前加入黄芩溶液,可以减少CPDs生成,照光后即刻加入川芎和EGCG溶液,可加快CPDs清除(P<0.05);UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53和pcna mRNA及蛋白表达水平,药物可在不同程度上下调上述基因及蛋白表达。结论UVB辐射对HaCaT细胞的损伤程度呈剂量依赖性并导致DNA损伤而产生光产物CPDs,细胞自身有清除CPDs的能力,所试3种中药均可减少光产物水平;这种光保护作用可能与受试中药影响p53和pcna基因mR-NA和蛋白表达有关。

摘要：目的研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞pcna、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨pcna、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计pcna、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;最后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点pcna、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况。结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内pcna、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组。在24 h的时间范围内,pcna基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是未染毒组(0μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到最大值。RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达最高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61。结论HQ可以诱导pcna、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性。

摘要：目的:了解猕猴桃根多糖体内抑瘤作用,揭示猕猴桃根多糖抑瘤作用机制。方法:采用配伍组实验设计研究方法,对采用不同剂量用药组和对照组的小鼠抑瘤率及pcna表达进行统计分析。结果:猕猴桃根多糖高剂量组pcna表达率63.86%,猕猴桃根多糖中剂量组pcna表达率50.22%,猕猴桃根多糖低剂量组pcna表达率58.33%,香菇多糖对照组pcna表达率55.11%,模型对照组pcna表达率75.88%。结论:猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂对荷瘤小鼠的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,pcna)阳性表达有剂量依赖性抑制作用。

摘要：目的 :立足于痰浊凝结为癌瘤形成与转移的重要病理因素之一 ,设计观察了消痰散结方 (半夏、胆南星、茯苓、枳实、陈皮、炙甘草等组成 )对裸鼠胃腺癌体内生长的抑制作用及其对胃癌组织中增殖细胞核抗原 (pcna)表达的影响。方法 :建立裸鼠MKN - 4 5胃腺癌模型 ,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中pcna的阳性表达率 ,同时观察了不同用药组瘤组织重量和病理学变化。结果 :在裸鼠体内实验观察中 ,消痰散结方组抑瘤率大于 30 % ,其瘤重明显低于空白对照组 (P 0 .0 5)。中药组裸鼠胃癌组织pcna表达水平明显低于空白对照组 (P <0 .0 5) ,表明细胞增殖活性降低。结论 :消痰散结方可抑制裸鼠胃癌的生长 。

摘要：目的探讨EZH2、pcna在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达及意义。方法按完全随机设计方法,将动物分为空白对照组5只和实验组50只。实验组用于建立金黄地鼠颊黏膜癌前病变模型,其中30只为藓化饮治疗组;10只为癌前病变对照组;10只为生理盐水治疗对照组。治疗8周时,各组同步取材。采用免疫组化方法,光镜下观察EZH2、PC-NA在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达情况。结果癌前病变对照组EZH2、pcna高表达率与空白对照组相比,有显著性差异(P0.05);生理盐水治疗对照组EZH2、pcna高表达率与藓化饮治疗组相比,有显著性差异(P<0.05)。结论中药藓化饮对金黄地鼠颊黏膜癌前病变具有明显的逆转作用。

摘要：目的:利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制COX-2基因表达,探讨RNA干扰对胃癌治疗的特异性和相关机制。方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2并导入裸鼠皮下移植瘤,在体外诱导RNA干扰,采用RT-PCR法、免疫组化法同时检测处理组和对照组COX-2基因表达,Western blotting检测了与细胞增殖相关信号分子p53、pcna及Ki67蛋白表达。结果:pTZU6+1-siRNA-COX-2导入裸鼠皮下移植瘤后14天,肿瘤体积明显变小。COX-2的mRNA表达由98.36%下调到43.44%,COX-2蛋白表达由86.24%下调至47.59%。pcna及Ki67蛋白表达均明显下调。对照组各指标均无明显变化。结论:siRNA明显抑制了COX-2表达,并抑制肿瘤生长,这可能与上调p53蛋白和下调pcna及Ki67蛋白表达有关。

摘要：目的:探讨Polo样激酶1(PLK1)在结肠直肠癌组织中的表达及体外RNA干扰抑制plk1对结肠直肠癌细胞增殖的影响。方法:应用免疫组化法测56例结肠直肠癌病人的癌组织和癌旁正常组织中PLK1及pcna的表达;用Western印迹法测肠癌主要细胞株中PLK1的表达;针对plk1基因设计3条小干扰RNA片段,瞬时转染高表达结肠直肠癌细胞株,采用实时定量PCR及Western印迹法测转染后PLK1的基因及蛋白的表达水平;CCK-8法测细胞增殖能力。结果:结肠直肠癌组织中PLK1、pcna的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05),两者的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度均有相关性(P<0.05),且两者间的表达呈正相关(P<0.05)。Western印迹法筛选出SW1116细胞株PLK1表达最高,下调PLK1表达后,其增殖能力较对照组都有所下降(P<0.05)。结论:PLK1在结肠直肠癌组织中呈过表达,可能在结肠直肠癌细胞增殖调节失衡中起重要作用,并进一步促进其迁移和浸润,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的一个重要指标。

摘要：目的:探讨心痛泰颗粒影响高脂诱导载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化模型斑块内细胞增殖的作用机制。方法:选取42只4周龄雄性ApoE-/-小鼠,给予高脂饮食喂养,另选取12只C57BL/6J野生型小鼠作为空白组,予普通饲料喂养。8周高脂喂食造模成功后,遵循完全随机设计方法,ApoE-/-小鼠按随机数字表法分4组,模型组、心痛泰颗粒低剂量组、心痛泰高剂量组及阿托伐他汀钙组,空白组为C57BL/6J野生型小鼠。连续6周灌胃给药,在无菌条件下处理动物,采集血清及分离主动脉,高倍显微镜下观察主动脉组织病理变化(斑块面积/动脉壁横切面积),采用罗氏全自动生化分析仪检测血脂指标及IHC法检测pcna的表达水平。结果:主动脉组织病理变化与模型组比较,治疗组比值均显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。血脂相关指标检测中,心痛泰颗粒低、高剂量组及阿托伐他汀钙组均能显著降低TC、TG、LDL-C,且心痛泰颗粒高剂量组优于低剂量组(P0.05)。与模型组比较,心痛泰颗粒低、高剂量组及他汀组均能升高HDL-C,但是这3组间差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,心痛泰颗粒能明显下调pcna阳性表达(P<0.01);且心痛泰颗粒高剂量组优于低剂量组(P<0.05)。结论:心痛泰颗粒能有效干预动脉粥样硬化的形成,缓解斑块内细胞的增殖,可能与心痛泰颗粒可以调节血脂及调控pcna阳性表达有关。

摘要：目的 :探讨后发性白内障与人工晶状体材料之间的关系。方法 :6只科研兔 (体重 2 .5～ 4kg ,由大连医科大学动物中心提供 )共 1 2只眼 ,随机分为 2组 ,每组 6只眼。麻醉后行透明晶状体囊外摘除术 ,并分别植入相同设计的PM MA及硅胶人工晶状体。术后 6个月 ,取出晶状体后囊 ,行免疫组织化学法染色 ,用医用多功能图像分析软件对晶状体后囊表面的增殖细胞核抗原 (proliferitingcellnuclearantigen ,PC NA)进行定量检测 ,用SPSS统计软件分析结果。结果 :植入硅胶人工晶状体组pcna平均值为 8.50± 1 .6 4,植入PMMA人工晶状体组pcna平均值为 6 .1 7± 1 .4 7,二者差异有显著性 (P <0 .0 5)。结论 :后发性白内障与人工晶状体的材料有关 ,硅胶人工晶状体较PMMA人工晶状体更能显著降低后发性白内障的发生率。