摘要：由于pcr影响因素多 ,获得理想扩增结果比较困难 ,有必要寻找一种简单有效的方法建立最佳扩增体系 .针对Mg2 +浓度、二甲基亚砜 (DMSO)浓度、变性时间、延伸时间、循环次数等因素进行 4因素 6水平和6因素 10水平均匀设计实验优化apoE基因 2 4 4bp片段的pcr扩增条件 .采用纯化模板和简易模板 ,只需 6～10次实验即可获得特异性、高产率扩增结果 .研究表明 ,将均匀设计用于pcr条件优化以及有关的样品处理、试剂选择等研究方面可以避免盲目性 。

摘要：用CTAB法提取小麦基因组DNA ,根据GenBank中公布的已知LMW GS基因序列 ,设计并合成染色体位点特异pcr引物 1～ 7;利用特殊小麦材料———六倍体普通小麦阿勃二体、1A、1B和 1D缺体 ,四倍体小麦及二倍体的一粒小麦和节节麦的基因组DNA为模板 ,在优化的pcr体系下进行特异性扩增和引物验证。结果表明 :引物 3和引物 4为小麦谷蛋白Glu D3位点LMW GS基因特异pcr引物 ,用其进行扩增时 ,循环反应条件为 :94℃变性 1min ,6 2℃退火 1min ,72℃延伸 2min。扩增产物大小约 1.6 0kb ,包括了启动子和完整编码区。引物 5和 7为小麦谷蛋白Glu B3位点LMW GS基因特异pcr引物 ,用其进行扩增时 ,循环条件为 :94℃变性 1min ,6 4℃退火 1min ,72℃延伸 2min。扩增产物大小约 1.4 5kb左右 ,包括了启动子和完整编码区。此外 ,用引物 3和 4通过pcr技术克隆到小偃 6号小麦Glu D3位点LMW GS基因(登录号为AY2 6 336 9) ;该基因编码的LMW GS含 9个Cys残基。这是首次发现含 9个Cys残基的LMW GS基因。它可能是小偃 6号加工品质优良的主要原因之一。

摘要：参照伪狂犬病病毒（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）ＮＩＡ－３株ｔｋ基因序列，设计并合成１对长２２ｍｅｒ的引物，引物间距１．５ｋｂ，其内包含完整的ＰＲＶｔｋ基因。以ＢＨＫ２１细胞繁殖的ＰＲＶ湖北地方强毒株（ＨＳ－９３０４）基因组为模板进行ＰＣＲ扩增。琼脂糖凝胶电泳检测显示扩增主带清晰，长约１．５ｋｂ，符合设计要求。扩增片段克隆至由ｐＵＣ１８质粒改制而成的Ｔ载体中，限制性内切酶ＢａｍＨＩ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切分析证实，扩增片段的酶切位点与ｔｋ基因一致，说明扩增和克隆片段包含ＰＲＶｔｋ基因。

摘要：用SBR反应器处理畜禽废水,提取其中好氧活性污泥总DNA,比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响,同时选择4个因素(DNA模板,Mg2+,dNTP,引物)对16SrDNA-pcr反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明,反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振荡法和摇床振荡法,可不经纯化直接扩增;DNA浓度对pcr结果影响最大,Mg2+和dNTP浓度的影响次之且程度相同,引物浓度影响最小;最佳pcr扩增体系(25μL)的组成为:模板DNA0.32μg,dNTP200μmol·L-1,Mg2+1.5mmol·L-1,引物1.0μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.2U,且最适退火温度为56.5℃。

摘要：目的对SNP基因分型芯片在个体识别中的应用价值进行研究。方法根据SNP不同等位基因的序列设计探针,制成分型芯片。采用4个复合pcr体系,用末端标记了Cy5的引物进行复合pcr扩增,产物与寡核苷酸探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值确定样品在各SNP位点的基因型。将这一方法应用于109份样本的分型,根据基因型分布统计分析31个SNP位点的法医学应用价值。同时,进行家系调查和方法灵敏度分析。结果方法的灵敏度为1ng;所检测的31个SNP位点的累积个体识别率为0.9999999999979(偶合率为2.13×10-12),二联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9609,三联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9970。家系调查的结果表明,这些位点等位基因由亲代向子代的传递符合孟德尔遗传定律。结论上述31个SNP位点为中高信息量位点,适用于法医学个体识别,可作为当前STR系统的补充。

摘要：为验证经处理后的穿山甲(Manis spp.)标本和甲片是否可以用于种间分子鉴定标记的开发及个体识别工作,本文在样品的预处理、消化、提取后纯化等方面对传统提取方法进行了改进,分别从穿山甲剥制标本、干皮标本及甲片中提取总DNA;然后用Cyt b基因扩增通用引物、12S rRNA基因全序列扩增引物、RAPD引物及微卫星引物进行了pcr扩增,并对部分扩增结果进行了序列测定。结果表明,除剥制标本的脚底皮张组织外,其他样品基本都可以提取出DNA。以此为模板的pcr扩增中,2种线粒体基因引物扩增出明显目的条带,RAPD引物扩增出种间特异条带,测序结果可用于种间特异性引物及SCAR引物的开发;微卫星引物在甲片样品中扩增稳定,可用于个体识别工作。

摘要：根据人的SRY基因核心序列设计合成1对引物C1、C2,应用pcr技术对野生狍(Capreoluscapreolus)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增,结果在野生狍雄性样本扩增出1条带(221bp),而在雌性样本未见扩增带,显示了Sry基因的性别特异性。应用这1对引物对42个未知性别狍肌肉组织样本进行了性别鉴定,结果雄性22个,雌性20个。对Sry-pcr产物克隆测序,得到185bp的Sry基因部分核苷酸序列。本试验为狍种群性别比率及其种群动态变化机制研究提供了资料。

摘要：为筛选适宜的DNA混合池法,采用两因素交叉分组设计,以混合样本数量(20、60和150个)和终质量浓度(50、100和150ng/μL)为组合因子,分析不同混合池对pcr扩增质量及SNPs检出率的影响。结果表明:在同一混合样本数量下,以终质量浓度100ng/μL建立的DNA混合池扩增的pcr产物纯度和OD260/OD280均优于50ng/μL,但对测序结果无显著影响;以终质量浓度150ng/μL建立的DNA混合池扩增的pcr产物杂带较多,不符合测序要求。在同一混合样本终质量浓度下,混合样本数越多,SNPs检出率越高。综上,从pcr扩增质量、SNPs检出率和试验成本来分析,以混合样本150个、终质量浓度100ng/μL组合建立的DNA混合池效果最好。

摘要：猪胸膜肺炎是引起保育到育肥阶段猪生产性能下降的一种重要传染病,该病的发生往往与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等病毒混合感染,引起猪群大批死亡,严重危害养猪生产。该病的病原为胸膜肺炎放线菌(APP),为促进江西省养猪业的发展,控制猪胸膜肺炎的流行,项目组从病原入手进行研究,前期已经分离到多株APP,并已经初步鉴定血清型。试验针对其毒素ApxIVA基因进行研究,参考NCBI上登录号为AX002405的ApxIVA毒素基因,设计目的基因大小为1 284 bp的特异性引物1对,并在上下游引物内加入酶切位点EcoRⅠ与SalⅠ进行毒素基因克隆。结果表明江西源APP应用pcr方法扩增ApxIVA基因,产物插入克隆载体,测序后与NCBI发表的APP ApxIVA基因序列对比分析,同源在98%以上,表明成功克隆到APP的ApxIVA基因。通过与10个国内外APP基因序列对比,发现本菌株与CP000569、FJ848575、FJ848573、GQ332268同源性较高,其中FJ848575、FJ848573、GQ332268均为中国分离株,CP000569为加拿大分离株。

摘要：[目的]DNA条形码技术是分子鉴定的最新进展之一,为了研究中国兰的DNA条形码技术,实现中国兰的快速鉴定。[方法]该文通过电泳成像技术、BLASTN核苷酸相似序列检验等分析方法,对一种中国兰ITS、ITS2、psbA-trnH、rbcL、matK等常用DNA条形码标准序列pcr扩增的方法进行了可行性检验。[结果]该方法可以在中国兰中有效扩增ITS2、psbA-trnH、rbcL、matK等条形码序列,并通过双向测序获得序列信息,ITS标准序列由于引物存在非特异性扩增,需要重新设计合适的引物。[结论]利用该方法,可以有效获得中国兰中ITS2、psbA-trnH、rbcL、matK等几种常见DNA条形标准序列,并大大简化了pcr反应操作步骤,为进一步研究中国兰的DNA条形码技术提供了参考和借鉴。