摘要：参照genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,设计1对2型特异的引物,对广东省20个猪场送检的患病断奶仔猪的病料进行pcr扩增,并将pcr产物连接到pMD18 T载体上,对重组质粒进行pcr、酶切鉴定及测序,最后发现pcr检测均为阳性.

摘要：作者参考国内外已发表猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)的基因序列和PRRSV相关的RT-pcr检测方法报道,根据PRRSV高度保守、高特异性的NP蛋白基因设计了一对引物,通过对疫苗毒株、细胞分离株的检测,建立了PRRSVRT-pcr检测方法。进一步对40份临床样品进行了检测应用,结果有17份阳性样品,与临床症状和血清学结果相符。

摘要：为有效弥补血清学检测奶牛布鲁氏菌病的不足,根据牛种布鲁氏菌的核苷酸序列设计pcr引物,通过优化PCB扩增条件,建立pcr快速检测奶牛布鲁氏菌病病原的方法。

摘要：〔目的〕　建立锦鲤疱疹病毒的pcr检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序。〔方法〕　分别利用蛋白酶K -酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA ,并设计两对特异性引物进行pcr检测。〔结果〕　异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K -酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段。同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物。〔结论〕　本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的pcr检测方法。

摘要：研究了检测斑节对虾(Penaeus monodon)的主要致病病原--对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)及斑节对虾杆状病毒(monodon baculovirus,MBV)的技术.用多重pcr检测方法,设计了两对特异性引物,从不同虾池中收集斑节对虾,提取DNA模板,同时检测两种对虾病毒.研究结果表明:该方法检测灵敏度高、特异性好,可检测至每毫克组织100个病毒粒子;从对虾组织中提取的DNA模板对病毒DNA的扩增无抑制,适合于对虾中两种病毒的同时检测.

摘要：目的:建立一种优于传统方法的、简单快速和灵敏度高的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的pcr检测方法。方法:以细胞色素b(cytochrome b)作为研究内容,设计并优化针对10种不同动物种属的引物,进行单种属引物和混合种属引物pcr反应的比较研究。结果:本文设计出可通过混合引物单pcr方式高效、敏感地检测10种常见动物种属细胞,并有效判断种属间细胞交叉污染的pcr检测方法。结论:本方法明显优于传统的细胞种属鉴定及种属间细胞交叉污染的方法,能显著提高对细胞资源库细胞、生产用细胞基质及治疗性细胞产品的质控能力。

摘要：该研究根据Genbank公布的猪博卡病毒Porcine bocavirus,PBoV的核苷酸序列,在其NP1保守区域设计一对特异性引物,建立一种能扩增多种猪博卡病毒亚型的pcr检测方法,并进行特异性试验,敏感性试验,重复性试验及可靠性检测.结果显示:所建立的pcr检测方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型无交叉反应;敏感度可以检测到58pg/μL;经3次重复检测,结果一致,重复性好;对阳性产物测序,与Genbank公布的猪博卡病毒NP1序列同源性在97.3%以上,可靠性强.用建立的pcr方法对2011年重庆部分地区猪场的266份育肥猪血清样本进行检测,结果45份为猪博卡病毒阳性,证明了在重庆地区育肥猪中存在PBoV感染的情况.

摘要：目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-pcr一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型。方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIVRT-pcr一步法。根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-pcr一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性。结果所建立AIV系列RT-pcr检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点。结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析。

摘要：根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确pcr检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌、鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。pcr产物经EcoRI酶切鉴定得494bp和177bp两个预期条带。最低检出基因组DNA浓度为800fg。用全菌体进行pcr时,本实验室分离鉴定的60株RA均能够扩增出特异性目的条带。25份临床疑似病例的分离菌株的pcr扩增阳性率与生化鉴定率完全一致。该方法表明能从病料组织培养8h的混合菌群中快速、准确地检测到RA,可用于RA的快速诊断和流行病学调查。

摘要：一种结核分枝杆菌RNA/DNA同步定量分析方法申请号：201310557556.6 公布号：CN103602737A申请日：2013.11.11 公布日：2014.02.26申请人：复旦大学；深圳市浩鼎生物科技有限公司发明人：李瑶；彭劲甫；骆子义；吴海；姜丽娟本发明属于生物工程检测技术领域,具体为一种结核分枝杆菌RNA/DNA同步定量分析方法。本发明包括如下步骤：结核分枝杆菌特异性定量pcr和RTqpcr引物和探针设计；标准DNA的克隆和质粒改造；细菌RNA与DNA的同时抽提；在同一反应管中同时进行RT-qpcr和pcr；荧光定量pcr检测方法的建立和优化。利用本发明的方法可以实现对结核分支杆菌的快速定量检测，并确定细菌的生长活性状态。本发明方法简单、灵敏度高、特异性强，解决了现有检测方法中检测周期长、阳性率低、不能区分细菌的生长状态的问题，对基础研究、临床快速诊断，及药物开发和药物使用效果的临床评价具有重要的实际意义。