摘要：目的建立pcr-rflp法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母。方法对比两者叶绿体ycfl基因,选择湖北贝母的特异性酶切位点EcoRI设计引物,优化反应条件,并进行方法学考察。结果退火温度58℃、循环数35时,湖北贝母或掺有湖北贝母的浙贝母经特异性引物扩增后能被EcoRI酶酶切,200~400bp处检出2条单一DNA条带,而浙贝母无此条带,检出限达3%。结论该方法方便快捷、灵敏度高,可用于浙贝母、湖北贝母及前者掺混后者的快速检测,为浙贝母质量控制提供参考。

摘要：目的　pcr rflp与多引物对pcr的乙肝病毒基因分型方法学比较。方法　自行设计利用限制性内切酶MboⅠ、BsTNⅠ、BsmAⅠ、HpaⅡ酶切S基因片段鉴定HBV基因型 (A～F)的pcr rflp方法。分别利用该方法和多引物对pcr对贵州地区 14 9份HBsAg、HBVDNA阳性血清进行病毒基因分型。结果　 14 9份乙肝患者血清中pcr -rflp方法成功分型 12 8份 (85 .91% ) ,多引物对pcr方法成功分型 10 8份 (72 .4 8% )。两种方法均能成功分型的标本 10 7份 ,其中B型 5 2份 ,C型 5 5份 ;两种方法分型结果完全一致。结论　本pcr rflp基因分型方法与多引物对pcr方法的分型结果一致 ,但pcr rflp方法的成功率及敏感度较高 ,图谱简单易读 。

摘要：马梨形虫病是一种由驽巴贝斯虫和马泰勒虫引起的蜱传血液寄生虫病,对我国养马业造成了巨大的经济损失。为了快速准确地鉴别驽巴贝斯虫和马泰勒虫,设计马梨形虫18S rRNA基因通用引物,运用pcr方法扩增序列,经过序列比对与分析,选用限制性内切酶DraⅠ对马梨形虫感染样本进行酶切。结果表明,马梨形虫两种病原18S rRNA基因pcr扩增产物长度为1500 bp。酶切后驽巴贝斯虫18S rRNA基因序列没有变化,马泰勒虫被切成大小为350 bp和1100 bp的两段,混合感染样本则形成350,1100 bp和1500 bp的3条带。实验建立的鉴别马梨形虫pcr-rflp的方法实验流程简单,节约实验成本,可以快速并准确的鉴别马梨形虫的种类,为马梨形虫的分类提供了新的方法。

摘要：目的基于ITS序列用pcr-rflp方法鉴别北柴胡药材掺伪藏柴胡的方法。方法分析并筛选出藏柴胡特有的限制性内切酶AseⅠ,用Primer Premier 5.0设计特异性引物,对引物pcr扩增条件和酶切试验进行优化,并对该方法的准确性进行了考察。结果pcr扩增的目的片段为331 bp,且建立的pcr反应方法对不同的酶均具有适应性。限制性内切酶AseⅠ将藏柴胡切成79 bp和252 bp两个片段,而北柴胡及其他柴胡均不能被酶切,且掺伪检出限为1%。结论pcr-rflp方法实现了准确鉴别北柴胡中的混伪品藏柴胡。

摘要：目的　探讨应用pcr rflp和pcr SSCP进行食源性感染常见致病菌鉴定的可行性。方法　选择细菌 2 3SrDNA基因作为靶基因 ,设计合适的通用引物进行pcr扩增 ,对 13种食源性感染常见致病菌扩增产物的酶切片段进行rflp和SSCP分析。结果　通用引物可以扩增出 13种食源性感染常见致病菌的 2 3SrDNA基因 ,HpaⅡ酶切产物的rflp分析表明 ,不同种属的致病菌表现出不同的rflp图谱 ;SSCP分析表明 ,13种食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大 ,不利于种属间鉴别 ,但有利于种内的鉴定。结论　运用pcr rflp和pcr

摘要：采用三因素五水平正交组合设计,探讨了野生中国樱桃的pcr-rflp扩增条件及限制性内切酶酶切反应体系,并用pcr-rflp技术对中国樱桃进行了分子亲缘地理学研究。结果表明,利用42种引物/酶组合,在13个中国樱桃居群中检测出多态位点比率为99.48%;在所有酶切片段中,发现了5种cpDNA单倍型(H1、H2、H3、H4、H5);根据单倍型的地理分布格局,将所研究的中国樱桃居群划分为4个地理单元,地理单元间的基因分化系数(GST)值为0.397,cpDNA基因流(Nm)为0.758;中国樱桃cpDNA总的遗传多样性(Ht)为0.166,地理单元内的cpD-NA遗传多样性(Hs)为0.005。分析结果说明,当第四纪冰川来临时,中国樱桃向南迁移并避难于云南省东南部山区、秦岭南坡及大巴山的东部等地区;当冰期结束、气候缓和时,避难于云南省东南部山区的中国樱桃分别向东北、西北方向回迁,避难于大巴山东段的中国樱桃则向东北方向迁移,形成现今的分布格局。

摘要：目的建立鹿血聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp)种间及种内鉴定方法并确定检测限度。方法根据梅花鹿、马鹿、猪、牛、羊、鸭的细胞色素b(cytb)基因序列的差异,设计并选取DNA限制性内切酶Eco RV和Mse I分别作为区分鹿和非鹿,梅花鹿和马鹿的工具。采用试剂盒法提取样品基因组DNA,经pcr扩增cytb片段后,分别进行rflp分析;在梅花鹿血基因组DNA中分别加入不同比例非鹿类动物血基因组DNA或马鹿血基因组DNA,pcr产物用限制性内切酶Eco RV和Mse I进行切割,确定检测限。结果经pcr-rflp分析,Eco RV切割鹿和非鹿cytb片段,前者得到2个片段(287、185 bp),后者未被切割;Mse I切割梅花鹿与马鹿cytb片段,前者被切成2个片段(281、191 bp),后者被切成3个片段(281、126、65 bp),191 bp的片段作为梅花鹿血的特征片段,126 bp的片段作为马鹿血的特征片段。梅花鹿血中加入非鹿类动物血基因组DNA的检测限为3%,加入马鹿血基因组DNA的检测限为6%。结论建立的pcr-rflp方法可以快速鉴定鹿血及相关伪品或掺伪品,也可区分鉴定梅花鹿源的鹿血或马鹿源的鹿血,为鹿血相关产品的质量控制提供了新的技术手段。

摘要：目的:改进中国药典2015年版中川贝母聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp)的鉴定方法,以防止真菌污染对结果的影响。方法:采用中国药典2015年版中pcr-rflp方法对川贝母样品进行检测,对pcr产物电泳中出现的杂带进行了序列分析,确认来源于真菌的扩增产物。重新设计pcr-rflp中的扩增引物,将下游引物设计在贝母与真菌序列差异较大的ITS2区域。对改进后的pcr-rflp方法进行了验证。结果:用含新引物的pcr-rflp鉴定时pcr产物未出现杂带,改进方法鉴定的准确性优于中国药典2015年版中给出的方法。结论:改进的pcr-rflp方法可以对川贝母进行鉴定,同时防止了真菌污染产生的杂带对结果判断的影响。

摘要：运用限制性片断长度多态性技术(Restriction Fragment Length Polymorphism,rflp)的衍生技术pcr-rflp,构建我国赤潮藻的特征酶切图谱,达到对赤潮藻进行区分的目的。主要内容包括两部分:(1)运用pcr方法设计引物并扩增出了9种赤潮藻的18S rDNA片段。(2)选择了TaqⅠ和PshBⅠ为实验用酶,并对9种赤潮藻的核糖体18S rDNA片段进行rflp分析,rflp结果显示,对9种赤潮藻区分明显。

摘要：枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是一种新入侵检疫性有害生物。应用pcr-rflp技术,快速区分鉴定了枣实蝇与我国口岸截获频率较高的5种检疫性实蝇。研究表明:设计出的2对引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)进行pcr扩增,其扩增片断大小分别为350 bp和450 bp。pcr扩增产物用2种限制性内切酶Dra I和MseI进行酶切,根据不同的酶切位点准确区分了6种供试的实蝇。此方法可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定。