摘要：为了建立一种能够快速鉴别pcv2a、pcv2b和pcv2d的方法,本研究针对pcv2a、pcv2b和pcv2d这3个基因型分别设计3组特异性引物,通过构建阳性标准质粒,筛选出最适引物组合,建立了一种pcv2分型的多重PCR检测方法,并对该方法进行优化后,开展特异性、灵敏度、重复性试验以及临床样品检测。结果显示,利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法,能特异性扩增出3个目的条带:pcv2a(321bp)、pcv2b(190 bp)和pcv2d(561 bp),探索出最佳退火温度和循环数分别为60℃和25个,与其他病原(PPV、PRV、PEDV、TGEV、PRRSV、CSFV)无交叉反应;对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数为103copies;同一模板的3次重复性试验结果一致;检测2个猪场流行的pcv2基因型毒株,并通过测序和进化分析进一步验证了该检测方法的准确性。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法有助于开展pcv2a、pcv2b和pcv2d的快速鉴别诊断,为pcv2的防控以及流行病学研究提供了技术支持。

摘要：为了快速鉴别猪圆环病毒2型(pcv2)的2个基因型pcv2a与pcv2b,根据pcv2a和pcv2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测pcv2a与pcv2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,该方法对pcv2a和pcv2b的敏感性分别为9.74fg/μL和16.3fg/μL;与猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等没有交叉反应性。用该方法对采自我国华东地区的125份断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的淋巴组织样品进行检测,结果显示,单独感染pcv2a占8.0%(10/125),pcv2b占41.6%(52/125),pcv2a或pcv2b共感染占50.4%(63/125)。选取pcv2a或pcv2b单独感染的淋巴结组织病料进行病毒分离和全基因序列分析,结果分离获得4株pcv2b和1株pcv2a,与该鉴别PCR的检测结果一致,说明本研究建立的PCR可以有效鉴别pcv2a与pcv2b,具有较高的特异性和敏感性,可用于断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的临床样品中pcv2的快速检测。

摘要：为了掌握四川地区近年猪圆环病毒(pcv2)的分子流行和分子进化动态规律。将2010-2013年期间采集自四川成都、德阳、雅安、西昌、遂宁、乐山、资阳等11个养猪地区的疑似pcv2病料共324份进行了检测与分析。设计1对检测pcv2的特异性引物,PCR检测病料表明pcv2阳性为229份,pcv2感染率为70.7%。随后对本实验室分离到的11株pcv2分离毒株进行全基因组克隆与序列分析,11株pcv2四川分离株的全基因组序列分析均为pcv2b基因型,各地分离株之间的全基因同源性为95.2%~99.7%,与参考毒株之间的全基因同源性分别为94.1%~99.7%;与国内外参考毒株相比,ORF1的核苷酸及推导氨基酸的序列的同源性分别为96.7%~100%、98.4%~100%,ORF2核苷酸及推导氨基酸的序列的同源性88.0%~99.7%、85.4%~100%,序列分析发现ORF2变异位点较多,而ORF1相对较保守。本研究结果显示:2010-2013年间,四川地区pcv2感染率高,主要分布在乐山、德阳等市,且流行的基因型以pcv2b为主。