摘要：为获得屯昌猪丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,pdk4)基因的编码序列(coding sequence,CDS)并分析其分子结构特征,研究屯昌猪、杜洛克猪及其杂交F1代不同组织中的pdk4基因表达水平,本研究以Genbank上公布的猪pdk4基因序列(登录号:NM_001159306)为参考设计引物,通过RT-PCR扩增、测序、拼接获得屯昌猪pdk4基因CDS区。结果显示:屯昌猪pdk4基因CDS区长度1224 bp,相对分子质量为46170.24 u,既没有跨膜结构也不存在信号肽,属于非分泌型蛋白,主要在线粒体中发挥作用,预测存在2个潜在的糖基化位点和33个磷酸化位点,α螺旋区域在预测的二级结构中占比最大。实时荧光定量PCR检测结果显示,pdk4基因在屯昌猪背最长肌中表达量最高,且极显著高于杜洛克猪及其杂交F1代猪。

摘要：为研究中国草原红牛丙酮酸脱氢酶激酶4(Pyruvate Dehydrogenase Kinase 4,pdk4)基因功能,本研究克隆了pdk4基因编码区序列(CDS),从mRNA水平检测pdk4基因在中国草原红牛各组织及其前体脂肪细胞成脂分化过程中的表达差异,最后进行生物信息学分析。根据NCBI公布的牛pdk4基因序列(登录号:NM_001101883.1)设计引物,PCR扩增和克隆测序,获得草原红牛pdk4基因完整CDS序列,应用生物信息学软件分析蛋白理化性质和结构,预测蛋白信号肽和磷酸化位点及构建系统进化树;通过实时荧光定量PCR检测pdk4基因在中国草原红牛各组织中mRNA的相对表达量及pdk4基因在前体脂肪细胞分化过程中mRNA水平上的表达情况。结果显示:本研究成功获得中国草原红牛pdk4基因CDS序列,长度为1223bp,编码407个氨基酸,与野牦牛同源性较高(99.8%),与埃及果蝠的同源性较低(89.7%)。pdk4基因在草原红牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、背最长肌和脂肪中均显著表达,其中在背最长肌中的表达量显著高于其他组织。成脂分化结果表明,pdk4基因mRNA表达量在0~4 d呈上升趋势,4^(6) d之间无显著差异。