摘要：目的 :研究青柿蒂提取液对2型糖尿病大鼠脂质代谢的影响及其对胰腺pdx-1mRNA表达的影响。方法 :购买健康雄性SD大鼠,留10只做正常组,其余使用STZ造模,成模后继续高脂高糖饮食诱导三周,待模型稳定后将大鼠分为三个组:疾病组给予生理盐水灌胃,吡格列酮组给予吡格列酮溶液灌胃,青柿蒂提取液组给予青柿蒂提取液灌胃治疗,连续灌胃四周后,取鼠股静脉血,使用TC、TG、HDL-C及LDL-C试剂盒检测不同处理组的血脂水平;处死大鼠取胰腺提取总RNA,并设计pdx-1引物,检测其mRNA表达情况。结果 :成模3w后检测正常组大鼠与模型组大鼠血脂水平比较,模型组大鼠血脂水平显著高于正常组,且差异有统计学意义;给药4w后检测正常组大鼠与不同处理组大鼠血脂水平比较,T2DM组大鼠血脂水平相近,且显著高于正常组,差异有统计学意义;青柿蒂提取物组血脂水平较接近吡格列酮组;给药4w后检测正常组大鼠与不同处理组大鼠pdx-1mRNA表达水平比较,疾病组大鼠胰腺pdx-1mRNA表达量均下调,T2DM组下调明显,与正常组相比差异有统计学意义;吡格列酮组治疗后与T2DM组无显著差异;青柿蒂提取物组pdx-1mRNA表达水平在用药后有所上调,接近正常组,较T2DM组有明显差异,差异有统计学意义。结论 :青柿蒂提取物能够较好的调节2型糖尿病大鼠血脂代谢,并能够影响胰腺pdx-1mRNA的表达水平,刺激胰岛β细胞产生胰岛素,本研究简要阐释了青柿蒂治疗2型糖尿病的机制,为临床寻找新的安全的治疗药物提供一定依据。

摘要：背景:原代分离的肝卵圆细胞具有双向分化的能力和横向分化的可塑性。目的:分离大鼠肝脏卵圆细胞,在化学诱导剂作用下使其定向分化为胰岛素分泌细胞。设计、时间及地点:对照观察细胞实验,于2007-05/2008-01在解放军总医院基础研究部,国家重点实验室完成。材料:SPF级SD大鼠,体质量(120&#177;20)g。方法:采用改良梯度离心法分离、培养大鼠肝卵圆细胞,并行免疫组织化学鉴定。随后将卵圆细胞置于含有诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖的RPMI1640培养液继续培养,同时以不含诱导剂的RPMI1640培养液培养的卵圆细胞作为阴性对照。主要观察指标:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附实验、放射免疫分析检测两组卵圆细胞胰岛素的表达。结果:改良的梯度离心方法分离的细胞具干细胞特点,可形成集落,并且OV6、CD34、Nestin染色呈阳性。分离的大鼠肝卵圆细胞,加入诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖诱导培养1周后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附、RIA检测均显示胰岛素分泌量远高于不含诱导剂细胞(P<0.05)。结论:化学诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖可以在短时期内作用肝卵圆细胞可启动胰十二指肠同源盒基因-l基因,使之定向分化为胰岛素分泌细胞。

摘要：背景:随着人胰岛素基因及某些血糖调节酶基因的克隆,以及重组载体为基础的基因克隆技术的建立,使骨髓间充质干细胞更容易向胰岛素分泌细胞分化,且具有体外扩增明显而无致瘤性的优点。目的:利用胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)基因转染人骨髓间充质干细胞,观察基因修饰向胰岛样细胞的分化情况。设计、时间及地点:细胞-基因学体外实验,于2008-01/07在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于糖尿病患者,由青岛大学医学院附属医院干细胞中心提供。方法:利用反转录聚合酶链技术构建pdx-1基因的cDNA,酶切后插入经相同酶切处理的含绿色荧光蛋白的空白载体PEGFP-N1,构成重组质粒,再进行BglⅡ、HindⅢ双酶切筛选、鉴定并测序。Percoll法分离培养人骨髓间充质干细胞,当细胞汇合至90%时胰蛋白酶消化传代。转染前1d加入无抗生素培养基,将第3代细胞按515;105接种于6孔培养板,适量重组载体及脂质体溶解后混合形成DNA-脂质体混合物,培养5h后更换普通培养液。同时设立对照组,在6孔板中进行空白质粒转染。主要观察指标:脂质体介导转染后,荧光显微镜观察细胞转染情况;免疫荧光染色检测pdx-1蛋白的表达;双硫腙染色鉴定细胞分化情况。结果:通过测序、凝胶电泳、酶切等确定pdx-1基因已正确插入重组质粒。荧光显微镜下,成功转染的骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,质粒转染效率约70%。转染8d的细胞pdx-1呈阳性表达,对照组细胞pdx-1呈阴性。转染后14d可见半悬浮的胰岛样细胞团,双硫腙染色呈棕红色,而未转染的对照组细胞双硫腙染色不着色。结论:pdx-1基因重组载体能够导入人骨髓间充质干细胞且稳定表达,并可以转化为胰岛样细胞。