摘要：目的构建plcε基因的shRNA表达载体及其功能鉴定。方法设计并合成针对plcε基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中构建重组载体pGenesil-plcε。重组载体经酶切、测序鉴定后转染膀胱癌细胞,RT-PCR及Western blot检测对膀胱癌细胞株plcε的抑制作用,流式细胞术(FCM)及MTT检测其对膀胱癌细胞株增殖活力影响。结果成功构建了针对2个plcε基因的shRNA表达载体。RT-PCR、Western blot检测结果显示:2个重组质粒载体转染T24细胞株后对plcεmRNA及对plcε蛋白表达均有明显抑制,流式细胞术结果表明细胞阻滞于G0/G1期,MTT检测表明重组的载体质粒明显抑制T24细胞增殖活力。结论针对plcε基因的shRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞中plcε基因的表达及膀胱癌细胞增殖。

摘要：目的体外实验研究plcε基因调节人膀胱癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法设计并合成针对plcε基因mRNA的寡核苷酸序列,构建重组腺病毒Ad-sh plcε。T24细胞感染Ad-sh plcε腺病毒后,用Western blot检测PKCα/β及TBX3、E-cadherin的表达;用划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞T24的迁移、侵袭能力。结果 Ad-sh plcε重组腺病毒感染膀胱癌细胞T24,对其plcεmRNA表达抑制率为75.6%,对其plcε蛋白表达抑制率为67.4%。Ad-sh plcε感染组T24细胞迁移能力较空载组和空白对照组明显减弱(P<0.05);重组腺病毒Ad-sh plcε感染组T24细胞穿膜细胞数较空载组和空白对照组明显减少(P<0.05)。Ad-sh plcε重组腺病毒感染膀胱癌T24细胞后下游PKCα/β的活化受到抑制(P<0.05),同时,TBX3的表达减少,而E-cadherin的表达增高(P<0.05)。结论通过以重组腺病毒干扰抑制plcε基因,能有效抑制膀胱癌T24细胞系中plcε下游PKCα/β的活化情况及TBX3,E-cadherin的表达变化,并且对T24细胞的迁移、侵袭能力具有一定的抑制作用。